刘巧琼，涂建欣，林晓云，熊一融，朱珊丽，陈韶，张丽芳

    (温州医科大学 分子病毒和免疫研究所、微生物学和免疫学教研室，浙江 温州 325035)

    ·论 著·

    沙眼衣原体主要外膜蛋白21-387的原核表达及其免疫原性

    刘巧琼，涂建欣，林晓云，熊一融，朱珊丽，陈韶，张丽芳

    (温州医科大学 分子病毒和免疫研究所、微生物学和免疫学教研室，浙江 温州 325035)

    目的：探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法：利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列，克隆至pET21a(+)原核表达载体构建重组质粒pET21a(+)/MOMP21-387，并进行原核表达和纯化，经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后，通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性，即通过ELISA法检测小鼠血清IgG和生殖道分泌物IgA抗体反应，乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果：在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白，经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带；并经Ni-NTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白，免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清IgG抗体和生殖道分泌物IgA抗体，至第6周达到高峰，MOMP21-387组的IgG和IgA抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05)；LDH检测结果显示，MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率，在10∶1、20∶1和40∶1和80∶1时均明显高于PBS组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性，为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。

    沙眼衣原体；主要外膜蛋白；原核表达；免疫原性

    沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)是全球最常见的性传播疾病(sexually transmitted diseases，STDs)病原体之一，通过性传播感染可致不孕和不育[1]，而E型Ct是目前泌尿生殖道感染最常见的血清型之一[2-3]。尽管有抗生素可供治疗，但由于Ct耐药性的增加及其潜伏感染、慢性迁延等特点[4]，全球每年生殖道Ct感染的新发病例超过9 000万[5]。因此，如何防治Ct感染是现在的研究热点之一。主要外膜蛋白(major outer membrane protein ......