温超玮，叶薇，周怀彬，吕建新，李伟

    (温州医科大学 检验医学院 生命科学学院 浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035)

    ·论 著·

    人线粒体DNA缺失宫颈癌细胞及其转线粒体细胞的建立与初步分析

    温超玮，叶薇，周怀彬，吕建新，李伟

    (温州医科大学 检验医学院 生命科学学院 浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035)

    目的：探讨溴化乙锭(EB)诱导法建立人线粒体DNA(mtDNA)缺失宫颈癌Hela S3细胞，以及再转入线粒体构建融合细胞的可行性，并对转线粒体细胞进行初步分析。方法：采用低剂量(100 ng/mL)EB诱导法建立mtDNA缺失的ρ0Hela S3细胞，通过普通PCR、荧光定量PCR(qPCR)进行mtDNA缺失鉴定。采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合法，以正常人血小板为mtDNA供体转入ρ0Hela S3细胞，构建转线粒体细胞(transmitochondrial cybrids)，并通过PCR、qPCR和透射电镜观察进行初步分析和鉴定。结果：普通PCR和qPCR结果证实EB诱导法能够成功建立ρ0Hela S3细胞，同时结合透射电镜证明转线粒体细胞能够恢复线粒体正常结构。结论：采用EB诱导法可成功建立ρ0Hela S3细胞，且通过细胞融合构建的转线粒体细胞能够恢复mtDNA复制和正常线粒体结构，为研究mtDNA突变与线粒体功能异常相关疾病的关系提供可靠的实验基础。

    线粒体DNA缺失细胞；转线粒体细胞；线粒体DNA拷贝数；线粒体嵴

    近数十年来，影响全球人类健康的许多疾病被证实与线粒体功能紊乱相关。研究发现，线粒体功能异常能够累及机体的神经传递、能量代谢、内环境平衡等，进而促进如阿尔茨海默病、帕金森氏症、Leber’s遗传性视神经病变、糖尿病、耳聋、冠心病、原发性高血压等疾病的发生[1-4]。自King等[5]利用溴化乙锭(ethidium bromide，EB)诱导构建线粒体DNA(mtDNA)缺失细胞(ρ0cell)后又成功以血小板为外源mtDNA供体与细胞进行融合，ρ0细胞和转线粒体细胞(transmitochondrial cybrids)已成为目前线粒体相关疾病的细胞生物学研究的主要方法之一。许多研究证实，将线粒体功能异常相关疾病患者的血小板与不同来源的ρ0细胞融合构建的转线粒体细胞能表现出一定程度的线粒体功能障碍[6-9]。本实验采用传统EB诱导法构建ρ0Hela S3细胞，并通过再转入正常外源线粒体，初步探讨转线粒体细胞的线粒体功能是否能够恢复 ......