刘淼清，王永飚，黄晓忠，朱利斌，陈肖鸣，李仲荣

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 小儿外科，浙江 温州 325027)

    ·论 著·

    体外两种方式培养的肠神经干细胞生物学特性比较

    刘淼清，王永飚，黄晓忠，朱利斌，陈肖鸣，李仲荣

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 小儿外科，浙江 温州 325027)

    目的：对纤维连接蛋白(FN)包被和未包被两种方式培养的肠神经干细胞进行生物学特性比较，探索肠神经干细胞体外扩增合适的培养方式。方法：从孕15 d SD胎鼠肠管分离出肠神经干细胞，用FN包被和不包被两种方式原代培养第5天的神经球，通过形态学、免疫荧光细胞化学及流式细胞仪检测对其生长状态、增殖及分化能力进行比较。结果：与包被组相比，未包被组的原代培养第5天的神经球呈半贴壁生长，球体形态较规则，球体中央开始变黑，神经球周边未形成大量放射状的神经丝；荧光镜下发现2组原代神经球的Nestin、BrdU都显阳性；包被组的球体周围放射状神经丝Tuj-1显阳性。流式细胞仪检测结果显示，与包被组的(12.67±2.16)%相比，未包被组的Nestin阳性细胞百分比显著增高，为(20.69±2.15)%(P<0.05)；与包被组的(12.69±1.13)%相比，未包被组的BrdU标记的增殖细胞百分比显著增加，为(35.82±2.11)%(P<0.05)；与包被组的(21.77±2.53)%相比，未包被组的Tuj-1阳性细胞百分比显著减少，为(10.67±1.14)%(P<0.05)。结论：未包被FN的体外培养加快了形成神经球的时间，且形态较规则，能较好地维持干细胞自我增殖，减少分化，适宜作为肠神经干细胞体外增殖培养方式。

    肠神经干细胞；增殖；培养；纤维连接蛋白

    位于肠道的肠神经系统(enteric neural system，ENS)是独立于交感、副交感神经的外周自主神经系统。国外研究[1]发现肠道也存在神经干细胞，即肠神经干细胞(enteric neural stem cells，ENSCs)。在国内，本课题组率先成功提取、培养ENSCs[2]。ENSCs与中枢神经干细胞生物学特性相比，可能存在对肠管的特异性，易与ENS结合、重建，提高移植干细胞的成活率和移植成功率。因而熟悉、掌握适宜的体外培养ENSCs的方法，对以后ENSCs的生物学特性研究、为移植治疗提供大量和稳定的干细胞来源有重要意义。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 孕15 d(E15)清洁级SD大鼠 ......