孟立平，蒋承建，赵飞，郭艳，池菊芳，郭航远

    (1.绍兴市人民医院 浙江大学绍兴医院 心内科，浙江 绍兴 312000；2.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；3.浙江中医药大学 研究生院，浙江 杭州 310000)

    ·技术与方法·

    大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进

    孟立平1，2，蒋承建1，赵飞1，2，郭艳3，池菊芳1，郭航远1，2

    (1.绍兴市人民医院 浙江大学绍兴医院 心内科，浙江 绍兴 312000；2.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；3.浙江中医药大学 研究生院，浙江 杭州 310000)

    目的：探索提高大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)原代培养效率和纯度的方法。方法：在原有组织贴块法培育大鼠原代VSMCs的基础上进行改良，分离出胸主动脉后进一步分离中膜，DMEM高糖培养基中加入10 μg/L血小板源性生长因子B(PDGF-B)。用细胞形态学及细胞免疫荧光对VSMCs进行鉴定。结果：6 d左右组织块周围有细胞爬出，12 d左右可以传代。镜下见细胞呈梭形，典型“峰谷”状排列生长；免疫荧光鉴定可见大量平滑肌肌动蛋白(SMA)，比传统方法获得的细胞纯度高。结论：加入PDGF-B可以缩短大鼠VSMCs原代培养时间，提高效率；剥离中膜可以提高大鼠VSMCs原代细胞的纯度。

    原代细胞；血管平滑肌细胞；组织贴块法；血小板源性生长因子B

    血管成形术和支架植入术是治疗严重冠状动脉粥样硬化的主要方法，术后发生血管再狭窄是心血管医师面临的一个棘手的问题[1]。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)的增殖和迁移以及从已经分化的收缩型表型向未分化的分泌型表型转化造成大量的细胞外基质分泌[2-4]，在术后再狭窄发生过程中发挥了重要的作用。体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌原代细胞，是研究VSMCs增殖迁移以及细胞表型转化的重要基础。目前大鼠胸主动脉VSMCs的培养方法主要包括酶消化法[5]和组织贴块法[6-7]。由于酶消化法成本较高，获得的细胞活性较贴块法差，所以国内一般采用组织贴块法来培养大鼠胸主动脉VSMCs。但组织贴块法获得VSMCs存在周期长、纯度低等缺点。因此，笔者对组织贴块法大鼠主动脉VSMCs原代培养方法进行了部分改良，缩短了培养周期，获得了纯度高、活性好的VSMCs。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物：SPF级SD大鼠 ......