洪广亮，谭佳平，丁颖威，赵光举，李萌芳，卢中秋

    (温州医科大学附属第一医院 急诊科，浙江 温州 325015)

    ·论 著·

    耐百草枯人肺腺癌细胞株的建立及其生物学特性

    洪广亮，谭佳平，丁颖威，赵光举，李萌芳，卢中秋

    (温州医科大学附属第一医院 急诊科，浙江 温州 325015)

    目的：建立耐百草枯(PQ)的人肺腺癌细胞株(A549/PQ)，并初步研究其生物学特性。方法：采用浓度递增诱导法建立A549/PQ，光镜观察细胞形态变化，以乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法、CCK-8法检测A549/PQ和亲本A549对PQ的敏感性，计算A549/PQ的半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI)，细胞计数法绘制细胞生长曲线和倍增时间，流式细胞技术分析细胞周期。结果：光镜下A549/PQ细胞变大、形态不规则、细胞间隙变大。PQ诱导A549/PQ细胞LDH释放明显低于其亲本细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。PQ诱导A549/PQ细胞IC50为1716.33 μmol/L明显高于A549细胞的215.03 μmol/L(P<0.05)，RI为7.98。A549/PQ细胞倍增时间明显高于A549细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。A549/PQ细胞G0/G1期细胞明显增多，S期细胞明显减少(P<0.05)。结论：成功构建对PQ耐药的A549细胞，其生物学特征与亲本细胞存在明显差异，为PQ毒理机制研究提供了良好细胞模型。

    百草枯；耐药株；生物学特性

    百草枯(Paraquat，PQ)，化学名1-1-二甲基-4-4-联吡啶阳离子盐，是一种快速灭生性除草剂，在全球范围内广泛应用。其对人畜有很强毒性，缺乏特效解毒剂，急性中毒病死率高达40%～80%[1]。PQ毒性可累及人体多个脏器，如肺、肝、肾、中枢神经系统等，其中肺是PQ中毒损害的最主要靶器官[2]。PQ在肺组织内特异性蓄积是造成肺脏持续损害的关键，其机制迄今尚未阐明[3]。近年，有学者[4-5]通过分析耐PQ的突变植株，发现了PQ在植物体内转运蓄积的重要机制，这为我们研究PQ在哺乳动物细胞跨膜转运机制提供了新思路。本研究通过浓度递增持续诱导筛选获得耐PQ的人肺腺癌细胞株(A549/ PQ)，旨在为PQ中毒毒理及其跨膜转运机制研究、探索逆转PQ毒性途径提供细胞模型。

    1 材料和方法

    1.1材料 人肺腺癌细胞(A549)由上海东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室保存，PQ购自美国Sigma公司，胎牛血清、1640培养基购自美国Gibco公司 ......