金洪国，周敏，金美玉，寇雪莲，何松彬，唐维国(温州医科大学附属舟山医院 神经内科，浙江 舟山 316021)

    缺氧条件下RhoA/Rho激酶及eNOS在血管内皮细胞表达的研究

    金洪国，周敏，金美玉，寇雪莲，何松彬，唐维国

    (温州医科大学附属舟山医院 神经内科，浙江 舟山 316021)

    [摘 要]目的：建立稳定的体外细胞缺氧模型，探讨人体脐静脉内皮细胞(HUVEC)在缺氧条件下RhoA蛋白和Rho激酶对其内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法：利用jetPEI-HUVEC、siRNA分别转染SH-SY5Y细胞、HEK293细胞和HUVEC后制备体外细胞缺氧模型，通过细胞裂解对相关蛋白进行免疫印迹分析。结果：常氧条件下RhoA蛋白在HUVEC中表达水平较低，但在缺氧条件下培育5 h后表达增加，同时缺氧3 h后Rho激酶表达增加，5 h后达高峰，而eNOS的表达恰恰相反。缺氧条件下，活化型RhoA蛋白下调eNOS的表达，而siRNA使RhoA蛋白表达减少从而上调eNOS的表达；Rho结合域抑制Rho激酶活性而上调eNOS的表达。结论：RhoA蛋白和Rho激酶的表达及活化抑制内皮细胞中eNOS的表达，因此可以通过某些药物如他汀类或Rho激酶抑制剂，抑制RhoA蛋白和Rho激酶的活性，从而增加eNOS的表达水平，对心脑血管疾病产生保护作用。

    [关键词]Rho激酶；内皮型一氧化氮合酶；内皮细胞；RhoA；siRNA

    近年的研究提示小G蛋白RhoA在血管的各种细胞功能调控中起着重要的作用。ROCK2是RhoA的下游效应分子之一，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，与RhoA-GTP结合时即可被激活[1]。Rho激酶调节应力纤维形成，介导平滑肌细胞收缩、增殖和迁移[2]。最近有研究发现Rho激酶参与脑和冠状动脉痉挛[3-4]、高血压病[5]、血管炎症与重塑[6]，以及动脉粥样硬化[7]的发生。在血管内皮细胞，L-精氨酸在内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)氧化催化作用下生成一氧化氮(NO)。NO不仅可以维持血管的正常状态和完整性，在调节血管张力和脑血流量方面也起着重要作用[8-9]。因此，提高eNOS表达，提升NO水平对脑血管疾病产生有益的影响[8，10-11]。Rho激酶可以下调eNOS的表达，影响NO的生成[12-13]。RhoA/Rho激酶调节eNOS表达的相关机制尚未见报道。本研究通过分子生物学方法，揭示缺氧条件下RhoA/Rho激酶调节eNOS在血管内皮细胞表达的相关机制 ......