高莉，解杨阳，王翔，汤燕静，汤静燕，陈静，沈树红

    (上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 血液/肿瘤科，上海 200127)

    Rho鸟苷交换因子12(ARHGEF12)基因在白血病细胞生长中的作用研究

    高莉，解杨阳，王翔，汤燕静，汤静燕，陈静，沈树红

    (上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液/肿瘤科，上海200127)

    目的：探讨Rho鸟苷交换因子12(ARHGEF12)基因对白血病细胞生长的作用及作用机制。方法：通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)对选定的U937、KG1a、ML2、Kasumi-1、THP1白血病细胞株进行ARHGEF12基因表达的检测，并用shRNA分别在高表达及低表达的白血病细胞株中敲低ARHGEF12，通过流式细胞术分析细胞的生长及凋亡情况，最后进行蛋白激酶芯片分析以发现相关作用机制。结果：部分白血病细胞株高表达ARHGEF12基因，在高表达的细胞中敲低ARHGEF12基因会使细胞生长受抑制，这与敲低后细胞凋亡增加、增殖抑制相关，并且和p53、CDK2及p27 Kip1磷酸化相关。结论：ARHGEF12对其高表达的白血病细胞的生长是必须的，敲低ARHGEF12基因导致白血病细胞凋亡增加、增殖抑制。

    ARHGEF12基因；白血病细胞；凋亡

    Rho鸟苷交换因子12(ARHGEF12)，也称白血病相关的Rho鸟苷交换因子(LARG)，是在1例急性髓细胞白血病中发现的MLL基因的融合伙伴基因[1]。ARHGEF12特异性催化与Rho家族成员RhoA结合的GDP和GTP进行交换，形成RhoA-GTP，从而激活RhoA并参与下游信号通路而发挥生物学功能[2]。Rho GTP酶也广泛地参与正常造血过程，包括造血干/祖细胞的自我更新、归巢及与骨髓微环境的相互作用

    和各系血细胞的发育过程等；其异常表达和活化也与血液系统疾病密切相关[3-6]。研究[7]显示，抑制RhoA及其下游的ROCK信号通路可抑制K562细胞生长。但到目前为止，ARHGEF12对白血病细胞的作用尚不清楚。本研究旨在通过对不同髓系白血病细胞株的研究，了解ARHGEF12对白血病细胞生长的影响并探讨其作用机制。

    1 材料和方法

    1.1主要试剂 人急性髓系白血病U937、KG1a、ML2、Kasumi-1、THP1细胞株，293T细胞购自ATCC细胞库或由其他实验室赠予，由本实验室传代冻存。

    RPMI 1640、DMEM、TRIzol购自美国Invitrogen公司；IMDM培养液购自美国Gibco公司；胎牛血清(FBS)购自美国Life Technologies公司；ARHGEF12及ABL基因引物由上海桑尼生物科技有限公司合成；反转录试剂盒购自大连Takara公司；qRT-PCR试剂盒购自大连Takara公司；ARHGEF12多克隆抗体、β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司；Annexin V/7AAD-A细胞凋亡检测试剂盒购自美国Becton Dickinson公司；嘌呤霉素(puromysin ......