周玲萍，冯成，汤雪斌，徐红蕾

    (温州医科大学附属第一医院 呼吸与危重症医学科，浙江 温州 325015)

    免疫磁珠分选法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞

    周玲萍，冯成，汤雪斌，徐红蕾

    (温州医科大学附属第一医院 呼吸与危重症医学科，浙江 温州 325015)

    目的：探讨一种高效、稳定的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)原代培养方法。方法：选取45 只1周龄Balb/c小鼠，随机分成3组，分别用酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法3种方法分离培养小鼠PMVECs，观察细胞形态学以及VI I I因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞，计算各组原代培养成功率及从原代培养开始到首次传代所需时间，测定细胞纯度，MTT法绘制生长曲线。结果：3组原代培养的细胞在倒置显微镜下均能见到短梭形、多边形的微血管内皮细胞，血管内皮细胞特异性标志物VI I I因子相关抗原表达阳性。免疫磁珠分选法组原代培养成功率及细胞活性显著高于其他2组，差异有统计学意义(P<0.01)，从原代培养至首次传代所需的时间短于组织贴块法组，差异有统计学意义(P<0.05)，细胞纯度显著高于酶消化法组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论：相比于酶消化法与组织贴块法，免疫磁珠分选法原代培养小鼠PMVECs具有重复性好，分离速度快，细胞纯度高及活性好的优点。

    细胞培养；原代培养；免疫磁珠；肺微血管内皮细胞

    建立高效的肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells，PMVECs)体外培养方法对急性肺损伤等疾病发病机制及药物治疗等方面的研究起着重要作用。目前文献报道体外培养PMVECs的方法主要有酶消化法、组织块培养法、免疫磁珠分选法，但由于PMVECs较脆弱难成活、生长缓慢、易污染、不易纯化等原因，目前其培养仍是一个难题。本研究对上述3种PMVECs体外培养方法进行比较，明确不同培养方法的优缺点，探讨出一种稳定的PMVECs培养方法。

    1 材料和方法

    1.1材料 健康1周龄Balb/c小鼠45只，雌雄不限，由温州医科大学实验动物中心提供。EndothelialCell Medium(Sciencell公司)，FBS(Gibco公司)，0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，I型胶原酶(Gibco公司)，大鼠抗小鼠CD31单克隆抗体(Invitrogen公司)，羊抗大鼠IgG磁珠(New England公司)，兔抗人VI I I因子相关抗原多克隆抗体(Santa公司) ......