严德文，胡盈盈，梁宗文，项军淼，余丹扬，段萍

    (1.台州市第一人民医院 妇科，浙江 台州 318020；2.温州医科大学附属第二医院 妇产科，浙江温州 325027)

    宫颈癌是第三大最常见的妇科肿瘤，同时也是全世界妇女癌症相关死亡的第四大原因；全球的宫颈癌发病率每年约为530 000例，每年近275 000人死亡；且发病年龄愈加趋于年轻化。可是，对于宫颈癌发生发展中涉及的分子机制仍然知之甚少。长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)被定义为长度大于200个核苷酸，具有基因表达调节功能但不编码产生蛋白质的非编码RNA转录本[1-2]。lncRNA能通过参与表观遗传调控、转录调控以及转录后调控这三个层面影响细胞的胚胎发育、干细胞分化、蛋白质编码基因调控、细胞增殖凋亡、肿瘤细胞的放化疗耐性等生理病理过程[2-3]。而且越来越多的研究证实lncRNA涉及到众多不同类型的肿瘤，如肝癌、胃癌、骨肉瘤、结直肠癌、乳腺癌等的增殖、转移侵袭等生物学过程[4-8]。其中，CasC7是RISC催化组件(AGO2)基因中一条9 346 bp的lncRNA，其在肿瘤中的相关研究尚未见报道。本研究旨在探究lncRNA CasC7在宫颈癌中的表达及其促增殖作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株：人宫颈癌细胞系HeLa细胞(HPV18阳性)、SiHa细胞(HPV16阳性)、CaSki细胞(HPV16阳性)及H8细胞(正常宫颈上皮细胞)均购自中国细胞库典藏细胞中心。

    1.1.2 标本：选取2014年6月至2016年6月于台州市第一人民医院进行手术的患者，其中40例宫颈癌组织收集自未经过放疗或化疗的广泛性子宫切除手术的宫颈癌患者，> IIa的标本取自放化疗前行阴道镜检查的患者。40例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)组织取自行宫颈环形电切术的患者并且根据组织病理学诊断分为CIN I 14例，CIN II 13例，CIN III 13例。40例宫颈正常组织取自经子宫全切手术的子宫肌瘤或子宫腺肌瘤患者，且均经病理确认为无肿瘤组织且人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)及薄层液基细胞学检测(thin-cytologic test，TCT)均为阴性。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均已签署知情同意书。

    1.1.3 主要试剂：胎牛血清、RPMI1640培养基、DMEM高糖培养基购自美国Gibco公司；总RNA提取试剂TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；ReverTra Ace qPCR RT Kit购自日本TOYOBO公司；SYBR实时荧光定量试剂购自美国罗氏公司；CCK-8试剂购自日本同仁株式会社；其余试剂为分析纯试剂 ......