魏婷婷，赵良才，高红昌

    (温州医科大学，浙江 温州 325035，1.实验动物中心；2.药学院)

    糖尿病肾病(diabetic nephropathies，DN)是糖尿病主要慢性并发症之一，在糖尿病人群中发病率高，是引发终末期肾功能衰竭的主要原因[1]。其具体发病机制目前尚不明确。目前，临床上对DN的诊断主要依赖于对尿微量白蛋白排泄率的检测，但该方法受肥胖、胰岛素抵抗等诸多因素影响[2]。在蛋白尿和组织病理改变出现前，机体中一些代谢物和代谢途径就已发生特征性改变，这些特征性的代谢变化很有可能就是DN发展演化过程中的潜在生物标志物[3-4]。因此，从代谢角度了解DN的发病机制对其预测、诊断和治疗起到关键性作用。基于核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance，1H NMR)的代谢组学方法已广泛应用于疾病的早期诊断、发病机制、药物研究等。本研究通过1H NMR的代谢组学方法探索db/db小鼠血清代谢物的改变和相关代谢途径，以期寻找DN相关的生物标记物。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 8周龄的雄性DN模型db/db小鼠8只，体质量为50～70 g；雄性C57BL/6J野生型小鼠9只，体质量为20～30 g，购自南京大学模式动物研究所，饲养于温州医科大学动物实验中心SPF级动物房，动物许可证号：SYXK(浙)2010-0150。

    1.2 试剂与仪器 三甲硅烷基丙磺酸钠(TSP)购自美国Sigma公司；D2O(99.9%氘代)购于英国剑桥同位素实验室；血糖试纸及血糖仪(德国贝朗医疗国际贸易有限公司)；Bruker AVANCE III 600 MHz NMR波谱仪(德国Bruker公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 样本收集：小鼠饲养至17周时，用小鼠代谢笼收集db/db小鼠与野生型小鼠的尿液。接尿前12 h和接尿过程中严格禁食，并且在接尿管内加50 μL 1%叠氮化钠作为防腐剂，置于冰中接尿使其保持低温。收集完毕，低温离心(3 000 r/min，4 ℃，10 min)，取上清液，置于-80 ℃冰箱保存。尿液收集后进行眼眶取血，血液静置30 min后离心(3 000×g，4 ℃，15 min)，取上清液用于1H NMR检测，置于-80 ℃冰箱保存备用。

    1.3.2 生化指标检测：采用血糖仪检测小鼠尾静脉的血糖值，采用全自动生化分析仪(MINDRAY BS-300)检测小鼠尿液中的生化指标，包括尿肌酐(urine creatinine，UCr)、尿白蛋白肌酐比(uri ......