甲酸基肽受体2抑制滋养细胞增殖侵袭功能的机制
划痕,质粒,引物,1材料和方法,2结果,3讨论
赵慎之,黄贤苹,项慧秋,廖婷婷,陈佳佳,许张晔(1.温州医科大学 第二临床医学院,浙江 温州 325035;2.温州医科大学附属第二医院 妇产科,浙江温州 325027)
妊娠是一个炎症反应过程,适度的炎症反应是维持正常妊娠的重要条件之一,而过度激活的炎症反应与多种病理妊娠相关,如流产、早产、子痫前期等[1-2]。脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)已被证实为体内最重要的促炎症消退介质,对多种炎症细胞和炎症相关因子有着显著的负性调节效应[3]。本课题组前期发现LXA4能激活绒毛外滋养细胞(TEV-1细胞)核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)mRNA和蛋白的表达[4],抑制妊娠局部肥大细胞迁移而保持妊娠炎性微环境的动态平衡[5],说明LXA4在妊娠过程中起着重要作用。同时,我们发现LXA4的甲酸基肽受体2(formyl peptide receptor 2,FPR2)能在胎盘组织中表达[6]。干扰TEV-1细胞增殖、迁移和浸润的因素都可能导致妊娠相关疾病的发生,本研究探讨FPR2对人滋养层细胞迁移和侵袭过程的影响,以期找到FPR2参与病理妊娠的病因及发病机制。
1 材料和方法
1.1 材料 TEV-1细胞株由香港大学Tsao S.W教授惠赠。胎牛血清和DMEM/F-12培养基购自美国Gibco公司;总RNA提取试剂Trizol购自上海普飞公司;酶标仪购自瑞士Tecan公司;蛋白抽提、定量、凝胶配制试剂盒和ECL化学发光试剂盒购自上海鼎国生物技术有限公司;Transwell试剂盒购自美国Corning公司;MTS试剂盒购自美国Promega公司,GIEMSA染色液购自美国Sigma公司;FPR2、ILK和GAPDH抗体购自美国CST公司。PCR反应引物、FPR2的基因过表达序列均由上海吉凯有限公司设计合成。
1.2 方法
1.2.1 TEV-1细胞培养:用含10%热灭活的FBS、25 mmol/L 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)、100 U/mL青霉素G和100 U/mL链霉素的DMEM/F-12培养基 ......
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