田静，侯志东，任湘鹏

    (温州医科大学附属眼视光医院 实验室中心，浙江 温州 325027)

    帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是第二大常见的进行性神经退行性疾病，其主要临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳等运动症状；典型的病理特征为中脑黑质致密区(substantia nigra pars compacta，SNpc)多巴胺(dopamine，DA)能神经元进行性变性缺失，残存的DA能神经元胞质内出现路易小体(Lewy bodies，LBs)，即α-突触核蛋白(α-synuclein，αS)包涵体。目前PD的病因和发病机制尚不完全清楚，现有的临床药物只能缓解PD症状，不能有效地阻断或延缓PD病理进程，其中一个重要的原因是缺乏阐明PD发病机制的理想动物模型。近年来学术界普遍认为αS异常聚集和病理传播是PD发病的核心机制[1]，具体表现为：αS编码基因的遗传多态性(如A53T突变)是导致家族性PD的重要原因[2]，而错误折叠的αS聚集体是PD病理标志物LBs的主要成分[3]，因此基于αS的PD动物模型成为研究热点[4]。采用脑内注射重组αS原纤维，模拟胞外αS在神经元之间传播扩散的朊病毒样特性而建立的αS原纤维PD模型为研究PD的病理机制提供了崭新的动物模型[5]。将错构的αS原纤维直接注射至正常小鼠纹状体脑区，发现αS可由纹状体扩散到中脑SNpc区，导致DA能神经元变性丢失、运动和认知损伤等PD病理特征[6]。然而，αS原纤维在中脑SNpc区直接导致的DA能神经元病理变化及行为学表型尚不清楚。本研究利用小鼠脑内SNpc定位注射A53T突变型αS(A53T αS)原纤维的方法，建立PD小鼠模型，检测模型小鼠的运动和认知行为学表型，并采用免疫组织化学染色法观察模型小鼠脑内典型的病理特征，为进一步探索αS在PD中的病理机制提供实验基础。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂：重组A53T αS蛋白[纯度>95%，辉源生物科技(上海)有限公司]，抗磷酸化α-突触核蛋白(phosphorylated α-synuclein，pSyn)、抗酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)及小胶质细胞特异性蛋白(ionized calcium binding adapter molecule 1，IBA-1)单克隆抗体购自美国Abcam公司，ABC免疫组织化学检测及DAB试剂盒购自德国Vector公司，其余生化试剂为国产分析纯。

    1.1.2 实验动物：健康10～12周龄雄性C57BL/6小鼠20只 ......