袁琳琳，喻晓芬

    (浙江省人民医院 手术室，浙江 杭州 310014)

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是肝脏最常见的原发性恶性肿瘤，其症状隐匿，在初次被发现时多处于中晚期，严重威胁患者健康[1]。对于中晚期HCC患者，目前能够显著延长患者总体生存期的靶向治疗药物依然有限，因此这类患者的总体预后依然较差[2]。近年来，微小RNA(microRNA，miRNA)在恶性肿瘤发生发展中的作用逐渐引起重视[3]。miRNA能够结合在下游靶基因的3’端非编码区，导致靶基因mRNA的降解或翻译受阻，从而抑制靶基因的表达，发挥调控肿瘤细胞增殖、运动、耐药性等生物学功能[4]。大量研究表明，多种miRNA在HCC中存在异常表达，并且与HCC患者的临床病理特征及预后具有显著相关性[5]。miR-202近来被发现在多种恶性肿瘤组织中存在异常表达，其在胃癌[6]、骨肉瘤[7]及胰腺癌[8]中存在低表达，能够抑制肿瘤细胞的增殖，从而发挥抑癌作用。有研究表明miR-202在HCC组织中低表达，且能抑制HCC细胞的增殖[9]。然而，miR-202对HCC细胞侵袭转移能力的调控作用目前仍不明确。本研究拟通过Transwell实验和Western blot实验探明miR-202对HCC细胞迁移侵袭能力以及上皮间质转化的影响，并进一步检索生物信息学数据库发现miR-202在HCC细胞中的作用靶点，利用Western blot及荧光素酶实验证实miR-202对下游靶点的调控作用。

    1 材料和方法

    1.1 材料 肝癌细胞系(Hep3B、Huh7、HCCLM3细胞)及永生化的正常肝细胞LO2购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，并在液氮中长期冻存。本实验所用细胞均利用DMEM培养基进行培养。DMEM培养基、胎牛血清、抗生素购自美国Gibico公司；转染试剂Lipofectamine 2000、荧光定量PCR试剂盒购自美国Invitrogen公司；引物购自上海生工生物工程技术服务有限公司；miR-202模拟物(miR-202 mimic)和miRNA空白对照(miRNA control，miR-control)、miR-202抑制物(miR-202 inhibitor)和miRNA阴性对照(miRNA negative control，miR-NC)、野生型Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 1 ......