吴昊，王敏，罗贤强，郭建春，郑斌娇，2

    (温州医科大学，浙江 温州 325035，1.浙江省医学遗传学重点实验室；2.Attardi线粒体生物医学研究院)

    现阶段常用于细胞分离的方法主要有密度梯度离心法、磁珠分离法和流式细胞分选技术。密度梯度离心法操作简单，但分选细胞效率低；磁珠分离法只能进行单因素分离，且会对细胞产生免疫刺激或机械损伤[1]。而流式细胞术不但能做到无菌分选，而且可多因素正选或负选，具有定量、高通量、分选纯度高等特点。近年来流式细胞分选技术越来越广泛地应用于目的细胞或粒子的快速分离，如外周血原代单核细胞、精子、蛋白聚合体、肿瘤细胞等[2-5]。闵智慧等[6]用不同的喷嘴分选Raji等细胞，发现使用不同的喷嘴对细胞的得率、活性有影响。黄莹莹等[7]使用流式分选技术分选CD8+T细胞，发现流式细胞技术分选法较免疫磁珠法效率更高，更能得到高活性细胞。VOROBJEV等[8]通过评估滤光片的性能对流式分选条件进行优化，用优化后的条件分选受寄生虫感染的红细胞，分选纯度比只用普通标准滤光片提高了50%～150%。本研究以J774A.1细胞株为实验对象，使用携带GFP报告基因的PX458空载质粒转染J774A.1细胞，以GFP荧光强度、7-AAD进行双因素分选，旨在建立富集PX458 空载转染J774A.1细胞的最佳方案，确立用于筛选J774A.1细胞的最佳条件。

    1 材料和方法

    1.1 材料 BD FACSAria II流式细胞分选仪(美国BD公司)；多功能酶标仪(美国MD公司)；PX458购自北京普如汀生物技术有限公司；QuickShuttle-Su perfast购自北京博奥龙免疫技术有限公司；7-AAD Viability Staining Solution购自美国Biolegend公司；GFP(D5.1)XP?Rabbit mAb购自美国CST公 司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)购自上海碧云天生物技术公司；J774A.1细胞株购自ATCC。

    1.2 方法

    1.2.1 脂质体转染：J774A.1细胞是来源于BALB/cN 小鼠网织细胞肉瘤的巨噬细胞株 ......