黄崇杰，曹伟兰，洪滉，刘鹏鹏，刘长宝

    (1.温州医科大学附属第二医院 肛肠外科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第五医院 甲乳外科，浙江 丽水 323000)

    大肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率在全球各肿瘤中位居第三，且有逐年升高的趋势[1]。结直肠黏液腺癌占大肠癌病例的10%～15%，易发生腹膜种植转移，对化疗的反应较差，所以根治切除率低，预后差[2]。目前关于腹膜种植转移的机制尚不十分清楚，TGF-β是一种多功能的多肽类细胞因子，TGF-β1是其中一种亚型，大量研究发现其在胰腺癌、胃癌、大肠癌中的表达量明显升高，且与肿瘤的预后较差直接相关[3-5]。miRNA与肿瘤的发生发展密切相关，一直是近几年来肿瘤研究的热点，let-7家族是第2个被发现的miRNA分子，而let-7a基因的下调已被公认为大肠癌发生发展中的关键事件，且已被证实是一个抑癌基因，其中c-myc、RAS和HMGA2为let-7的下游靶基因。最新研究表明它可以调控TGF-β1信号通路，影响细胞增殖和分化[6]，但对黏液腺癌腹膜转移方面的研究尚未见报道。本研究通过慢病毒载体介导携带人let-7a基因导入人结肠黏液腺癌LS-174T细胞，上调1et-7a基因的表达，通过体外实验，观察其对肿瘤的生长抑制作用、侵袭转移及TGF-β1蛋白表达的影响，从而探讨其与结肠黏液腺癌腹膜转移的关系。

    1 材料和方法

    1.1 细胞株及主要材料人结肠黏液腺癌细胞LS-174T购自中国科学院上海分院，let-7a过表达慢病毒载体系统由上海吉凯基因科技有限公司构建完成，DMEM培养基购自美国Gibco公司，0.25%胰蛋白酶购自美国Gibco公司，胎牛血清购买自杭州四季青公司，兔抗人Anti-TGF-β1多克隆抗体，山羊Anti-Rabbit IgG购自英国Abcam公司，RT-PCR反转录试剂盒购自加拿大MBI fermentas公司，Real-time试剂盒购自日本Toyobo公司，RNA提取液TRIzol购自美国Invitrogen公司，RT-qPCR引物购自上海生工生物工程有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞转染:①结肠黏液腺癌LS-174T细胞分为5组:空白对照组(A组，不进行病毒转染)；转染空病毒组(B组，只含有EGFP，浓度1×107TU/L)；C1转染组(C1组，浓度1×106TU/L):转染hsa-Let-7a(含let-7a病毒和EGFP)；C2转染组(C2组，浓度1×107TU/L):转染hsa-Let-7a(含let-7a病毒和EGFP)；C3转染组(C3组 ......