张祥建，张欣欣，马海广，胡晓清

    (1.温州市中心医院 肿瘤外科，浙江 温州 325000；2.温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江 温州325027)

    乳腺癌是严重危害女性健康的最常见的恶性肿瘤，其发病率逐年上升[1]。尽管基于分子分型的乳腺癌的个体化综合治疗提高了乳腺癌的疗效，但肿瘤的原发或继发耐药、远处转移仍是治疗失败的最主要原因。目前中药在乳腺癌的治疗中得到了广泛的应用，包括化疗减毒、增强免疫、抑制转移等[2-4]。也有部分临床研究显示中药与化疗的联合应用，其除了化疗减毒外，还可以逆转肿瘤耐药[5-6]。然而，其具体作用机制仍缺乏科学的理论依据，同时，中药对肿瘤的治疗和逆转耐药作用是否具有一定的肿瘤组织特异性亦缺乏基础数据。因此，本研究从TLR4/NF-κB信号通路的角度，探讨扶正中药抗乳腺癌的机制，及增加化疗药物敏感性的干预靶点，从而为特定的肿瘤表型及靶点进行中西医结合的药物治疗提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 药品与试剂：扶正中药(黄芪30 g、党参12 g、白术9 g、茯苓12 g、仙灵脾15 g、肉苁蓉12 g、山萸肉12 g、巴戟天12 g)制成冻干粉，溶于双蒸水中，经0.2 μm孔径针式过滤器过滤后使用。DMEM、MEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PBS均购自美国Gibco公司；紫杉醇(paclitaxel，PTX)购自美国Medchem Express公司；MTT、DMSO、碘化丙啶(PI)、牛胰岛素均购自美国Sigma公司；Annexin V/PI试剂盒购自美国Beckman Coulter公司；β-actin抗体及二抗购自上海康成生物科技有限公司。

    1.1.2 仪器：恒温CO2细胞培育箱(美国Thermo Forma公司)；低温高速离心机(日本Kubota公司)，Synergy2酶标仪(美国Biotek公司)；流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)；Odyssey双色红外激光扫描成像系统(美国Licor公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：MDA-MB-231、T47D人乳腺癌细胞购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。在含10%胎牛血清、0.01%牛胰岛素、100 U/L青霉素和10 mg/mL链霉素的MEM高糖培养基中培养MDAMB-231细胞，在含10%胎牛血清、0.01%牛胰岛素、100 U/L青霉素和10 mg/mL链霉素的DMEM高糖培养基中培养T47D细胞，37 ℃、5% CO2恒温无菌养育箱中生长 ......