傅超，梅婷婷，汪鸿涛，陶勇，王东，裘建明，杨关根

    (1.浙江中医药大学附属杭州第三医院 肛肠外科，浙江 杭州 310009；2.宁波市第一医院 肛肠外科，浙江 宁波 315000)

    结直肠癌是常见的高度恶性的消化道肿瘤之一，在世界范围内致死率依然居高不下[1]。诊断时常已是中晚期，预后不佳。因此，找到新的肿瘤标志物及时发现预后不良高危患者，一直是研究的热点与难点。研究证实肿瘤浸润T淋巴细胞(tumourinfiltrating T lymphocytes，TILs)可改变肿瘤微环境，参与或抑制恶性肿瘤细胞的增殖和迁移[2]。目前发现CD4+、CD8+T淋巴细胞已在肝癌[3]、卵巢癌[4]、胰腺癌[5]、膀胱癌[6]等实体恶性肿瘤存在差异性改变，并可预测其预后，但对于结直肠癌预测研究的报道甚少。因此，本研究探讨分析CD4+、CD8+T淋巴细胞水平与结直肠癌患者临床病理特征及其预后的关系，并评价其作为一项预后标志物的可能性。

    1 对象和方法

    1.1 对象 入选标准:①所有患者均初次接受标准化结直肠癌手术治疗；②术后病理确诊为结直肠癌，且根据AJCC第7版TNM分期标准；③未接受其他任何靶向抗肿瘤、新辅助放化疗等治疗；④排除各种免疫系统疾病如血液病等；⑤排除合并其他恶性肿瘤患者。根据上述标准，收集2012年1月至2014年1月浙江中医药大学附属杭州市第三医院肛肠科收治的行手术切除并经病理证实的109例结直肠癌患者临床病理资料及术后标本。其中男71例，女38例，年龄32～78岁。本研究经本院伦理委员会通过，患者或其家属签署知情同意书。

    1.2 方法

    1.2.1 主要试剂:鼠抗人CD4+单克隆抗体(购自美国Chemicon公司)；鼠抗人CD8+单克隆抗体(购自武汉博士德生物工程有限公司)；抗鼠IgG抗体(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)；免疫组织化学试剂盒及DAB显色试剂盒(购自武汉博士德生物工程有限公司)。

    1.2.2 免疫组织化学检测:①109例结直肠癌组织标本经4%多聚甲醛固定 ......