余明军，赵娜，王海明

    (杭州市第三人民医院 普外科，浙江 杭州 310009)

    甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，其中有约80%为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)[1]。近年来，甲状腺癌的发病率仍在迅速增长，PTC的增长速度尤为可观，占所有女性肿瘤榜首，而在男性肿瘤中居第2位[2]。大部分PTC在手术切除结合碘131及甲状腺素治疗后可达到临床治愈，但仍存在5%的5年复发率[3]。目前PTC的发病机制仍不明确，寻找治疗和诊断PTC的小分子标志物对于提高其诊断率和治疗效果都具有重要意义。

    miRNA是一类长为21～25个核苷酸片段的小分子非编码RNA，在癌症的发生发展中扮演着重要角色。研究表明，miR-144在肺癌、鼻咽癌、肝癌、肾 癌、胰腺癌、结直肠癌和胃癌等癌症中发挥抑癌基因的作用[4-6]。JAHANBANI等[7]检测了113例甲状腺组织(其中包含81例PTC)中84种miRNA的表达情况，证实miR-144在PTC组织中低表达。另一项细胞水平的研究证实，miR-144可以通过抑制肿瘤细胞自噬，提高甲状腺未分化癌对铂类的化疗敏感性[4]。目前尚未见有研究涉及miR-144对PTC细胞增殖能力及细胞周期的影响。本研究检测了PTC细胞及正常甲状腺细胞中miR-144的表达水平，研究miR-144对PTC细胞增殖能力、单克隆形成能力及细胞周期的影响，可以为PTC早期诊断、预测复发以及找寻新的治疗靶点提供新思路。

    1 材料和方法

    1.1 材料 人PTC细胞K1、TPC-1 和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1 均购自中国科学院上海细胞库。qPCR试剂盒购自上海欣百诺生物工程有限公司；RPMI1640 培养基和DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；miR-144 mimics、miR-144 inhibitor、NC mimics、NC inhibitor购自上海吉玛制药技术有限公司；脂质体LipofectamineTM2000购自美国Invitrogen公司；MTT溶液、DMSO溶液购自美国Sigma公司；流式周期检测试剂盒购自美国Sigma公司；兔抗人Anti-Cyclin D1购自美国Abcam公司，鼠抗人β-actin购自美国Epitomics公司；其他试剂均是国产分析纯。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：从液氮罐中取出人PTC细胞K1、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1，放置于37 ℃水浴锅中 ......