王靓，董思思，陈婧，吴笑英，阮璐雅，潘优津，胡云良，郑超

    (1.温州医科大学附属第二医院内分泌代谢科，浙江温州325027；2.临沂市妇女儿童医院检验科，山东临沂276000；3.温州医科大学附属第二医院检验科，浙江温州325027)

    1，25-二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]作为维生素D最重要的活化形式，通过与体内一种特异性核受体，即VitD受体(VDR)结合而起作用。研究表明，1, 25(OH)2D3能调控体内钙磷代谢以维护骨健康，低血清1, 25(OH)2D3水平与内皮细胞功能障碍、动脉粥样硬化、心血管疾病(包括高血压、冠状动脉疾病、缺血性心脏病、心力衰竭)的风险增加和胰岛素抵抗相关[1-4]。但目前鲜见1, 25(OH)2D3对软脂酸(palmiticacid，PA)所诱导的胰岛素抵抗的血管内皮细胞功能障碍作用的机制研究。本研究探讨1, 25(OH)2D3是否通过激活胰岛素抵抗的血管内皮细胞的Akt/eNOS信号通路促进产生NO，影响内皮素1(endothelin-1，ET-1)的表达，从而减轻血管内皮细胞的损伤。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞和试剂：人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)购自中国科学院细胞库。骨化三醇注射液购于德国APPPharmaceuticals公司，棕榈酸及BSA(FAFBSA)购于美国Sigma公司。DMEM培养基、0.25%胰酶-EDTA购于美国Gibco公司。兔peNOS(Ser1177)抗体购于美国CellSignaling公司，鼠pAkt(Ser473)抗体、鼠单克隆GAPDH抗体购于美国BioworldTechnology公司。CCK-8试剂盒购于日本同仁化学研究所，葡萄糖检测试剂盒购于北京普利莱公司，硝酸盐/亚硝酸盐荧光检测用试剂盒购于美国Cayman公司，ET-1以及VDR引物购于上海生工生物工程有限公司。

    1.1.2 仪器：荧光显微镜、多功能酶标仪、二氧化碳孵箱、化学发光凝胶成像系统、恒温水浴箱、LightCycle480分析仪、冷冻离心机、PCR仪、MiniVE垂直电泳系统、倒置显微镜。

    1.2 方法

    1.2.1 分组：将HUVECs设置为对照组、PA组、VD组。其中对照组为仅DMEM培养基培养的未干预HUVECs。PA组为最佳浓度0.6mmol/LPA诱导的HUVECs，即胰岛素抵抗血管内皮细胞模型。VD组为最佳浓度1nmol/L1, 25(OH)2D3干预后的上述胰岛素抵抗血管内皮细胞模型 ......