张益前，庄芝芝，沈猛，庄捷秋，蔡晖

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院，浙江 温州 325027，1.肾内科；2.儿童肾内科)

    高血压是脑卒中、冠心病的危险因素，也是世界范围内导致死亡的主要原因之一，其确切发病机制尚未完全明确。钠-氯共同转运子(sodium chloride cotransporter，NCC)表达在肾脏远曲小管上皮细胞，负责重吸收5%～10%的过滤 钠[1]。过度活跃的NCC功能被认为是导致高血压发展的因素之一。因此，研究肾小管NCC上游调控蛋白对高血压的防治具有重要意义。Ran结合蛋白M (Ranbinding protein M，RanBPM)是一种核质蛋白，涉及转录调节、细胞形态调节和受体激活细胞内信号通路的调节[2]。研究表明，RanBPM可通过调节c-Raf稳定性抑制ERK1/2的活化[3]。本课题组早期的研究表明，WNK4通过激活ERK1/2信号通路来抑制NCC，酵母双杂交筛选工具和共免疫沉淀的预实验初步数据也显示WNK4与RanBPM存在相互作用[4]。本研究探讨RanBPM是否通过ERK1/2信号传导通路调控肾小管NCC的蛋白表达以及对WNK4功能的影响，为高血压的诊治探索新的治疗靶点。

    1 材料和方法

    1.1 材料 小鼠远曲小管(mouse distal convoluted tubule，mDCT)细胞获赠于芝加哥大学Robert S.Hoover教授实验室，HEK 293T细胞购自中国科学院细胞库。脂质体2000、RNAiMax脂质体购自美国Invitrogen公司；抗myc抗体、抗HA抗体等兔多克隆抗体来自美国Abcam公司；总NCC抗体购自美国PhosphoSolutions公司；t-ERK1/2、 p-ERK1/2、β-actin等多克隆兔抗为美国Cell Signal Tech-nology公司产品；其余试剂均为市售分析纯。

    1.2 细胞培养和转染 mDCT和HEK 293T细胞常规培养于含5% FBS+1%青/链霉素的DMEM/F12(1:1)培养液中，置于细胞培养孵育箱(37 ℃，5% CO2，饱和湿度)内孵育[4]。根据试剂盒说明书利用脂质体2000转染质粒myc-RanBPM，转染48 h后，裂解细胞进行进行Western blot ......