石哲玮，刘胜新，秦铖璠，章柳萍，钱彩珍

    1.温州医科大学附属诸暨医院 心血管内科，浙江 绍兴 311800；2.温州医科大学 第二临床医学院，浙江 温州 325035；3.诸暨市中医医院 心血管内科，浙江 绍兴 311800

    高血压肾病初期主要表现为肾小管稀释功能减退，随着疾病的不断进展，大量正常的肾单位受到破坏，引起肾脏弥漫性纤维化以及慢性肾功能不全，最终引起肾脏硬化萎缩[1]。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是导致高血压肾病患者肾小管浓缩和稀释功能下降的重要原因之一，同时也是诱导肾脏纤维化的重要病理过程[2]。血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)是肾素-血管紧张素-醛固酮系统中重要的血管活性成分，是促进肾小管上皮细胞EMT改变以及肾脏纤维化进程的关键调节因子[3]。给予体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞适宜浓度的Ang II处理可促进肾小管上皮细胞形态学以及EMT相关蛋白表达水平改变[4]。因此，本研究通过给予体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞Ang II处理诱导肾小管上皮细胞EMT过程，从而构建高血压肾病细胞模型。

    miRNA是短的单链RNA序列，在生物系统中广泛表达，其主要作用为调控基因在多种生理和发育过程中的表达[5]。既往研究表明miR-155在多种心血管相关疾病中发挥重要的调节作用。WANG等[6]的研究表明，下调miR-155表达可以保护C57BL/6小鼠免受脂多糖感染引起的心脏功能障碍并减少心肌细胞凋亡。ZHANG等[7]的研究表明，miR-155可以减少氧化修饰低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡，从而延缓动脉粥样硬化的形成。ZHANG等[8]的研究结果表明，miR-155可作为改善高糖诱导的心脏纤维化的治疗靶点。本研究进一步观察miR-155在调控肾小管上皮细胞EMT过程中的作用并探究其可能的信号转导机制，从而为延缓高血压病诱导的肾脏纤维化以及寻找新的高血压肾病治疗靶点提供思路。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞：NRK-52E肾小管上皮细胞购自中国科学院上海细胞所，用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养并置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中。定期更换细胞培养液，当细胞密度达到70%～80%时，进行传代。

    1.1.2 实验材料和仪器：Ang II购自北京索莱宝科技有限公司；SC79购自美国MedChemExpress公司；DMEM高糖培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；Collagen I、N-cadherin、α-SMA、TGF-β和GAPDH抗体购自美国Abcam公司；BCA蛋白定量试剂盒、CCK8和RIPA细胞裂解液购自上海碧云天生物技术有限公司；ECL超敏发光液购自美国Thermo Fisher公司；反转录试剂盒购自上海东洋纺生物科技有限公司；Mastercycler X50荧光定量PCR仪购于德国 Eppendorf公司；ChemiDoc XRS+System曝光仪购 于美国Bio-Rad公司；BX63 荧光显微镜购于日本Olympus公司 ......