范兰兰，孔珊珊，吴彬彬，叶晓霞

    温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035

    4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid，PBA)是一种小分子量的短链脂肪酸，是一种被批准用于治疗小儿遗传性尿素代谢障碍、镰刀形细胞贫血和地中海贫血的临床药物[1-2]。2006年有研究报道PBA作为分子伴侣可以通过抑制内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)反应，重塑II型糖尿病鼠血糖稳定[3]。近几年研究表明，PBA可以通过抑制ERS反应，减少氧糖剥夺后的SH-SY5Y细胞的凋亡[4]，减少原代海马神经元细胞的损伤[5]、减小骨关节炎关节损伤[6]、减小脑组织缺血性损伤[7]、减少肝细胞损伤和凋亡[8]、治疗II型糖尿病[9]、治疗特发性肺纤维化或肺动脉高压[10]等。

    本课题组前期研究发现PBA通过抑制GRP78的表达来缓解ERS，但是与正常细胞中的GRP78表达量相比仍然偏高。能否以PBA为模板，改造其结构，寻找到比PBA作用更强的抑制剂呢？我们尝试设计并合成了11个PBA类似物，并探讨其对PC12细胞过度ERS的抑制作用。

    1 材料和方法

    1.1 仪器和试剂

    1.1.1 仪器：中科牛津-Quantum-Iplus-400M核磁共振波谱仪(CDCl3或DMSO-d6作溶剂)；LTQ-Velos 液相色谱质谱联用仪；SHZ-D(III)循环水式真空泵；ZQJ-25手提紫外仪；BSA124S-CW电子天平；DF-101S集热式磁力加热搅拌器；XRS+凝胶成像系统；MX190酶标仪；美国Thermo-6N98二氧化碳培养箱；ALLEGRA-64R低温超速离心机。

    1.1.2 试剂：PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)来源于上海青旗生物科技有限公司，MTT试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；过氧化氢(H2O2，浓度为30%)、DMSO购自美国Sigma-Aldrich公司；GRP78抗体、LC3抗体、GAPGH内参、Marker试剂购自武汉三鹰生物技术有限公司，乙酸乙酯、甲醇、石油醚、毒胡萝卜素(thapsigargin，TG)、3-甲基腺嘌呤、苯基丁酸等均购自上海阿拉丁生物科技股份有限公司；血清、双抗、胰酶(含EDTA)以及DMEM培养基均购自中国赛默飞世尔科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 化合物A1-A5 的合成：称取4-(氨基苯基)丁酸(1 g，5.61 mmol，1 eq)和三乙胺(1.3 mL ......