谷甸娜，陈涵斌，钱方璟，陈扬，叶志强

    1.温州医科大学附属第一医院 肿瘤内科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；3.温州医科大学附属第一医院 乳腺外科，浙江 温州 325015

    胰腺癌是目前已知恶性程度最高的肿瘤之一，其早期诊断困难，易于侵袭转移，5年生存率只有5%左右[1]。胰腺癌组织内富含大量的结缔组织，血供不足造成缺氧、低营养的微环境，快速增殖的肿瘤更是增加了对物质代谢的需求[2]。胰腺癌具有高水平的糖酵解代谢，这不仅可满足肿瘤快速增殖时对ATP、生物大分子的需求，而且乳酸可酸化肿瘤微环境促进转移[3-4]。因此，探索通过阻断胰腺癌糖酵解来控制肿瘤能量生成正备受关注。

    环状RNA ciRS-7又叫做小脑变性相关蛋白1 反义转录物(antisense to the cerebellar degeneration-related protein transcript, CDR1as)，包含70多个miR-7的识别位点，可以抑制miR-7活性而提高miR-7靶基因表达[5]。本课题组之前的研究表明，miR-7可通过调控糖酵解代谢而抑制胰腺癌进展[6]。胰腺癌微环境中最显著的特征是含有密集的肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts, CAFs)，CAFs对于胰腺癌细胞不是简单的旁观者，而是肿瘤发展的关键推手[7]。前期预实验提示，由胰腺癌组织分离的CAFs可分泌大量外泌体，其内具有高水平ciRS-7。本研究旨在探讨CAFs经外泌体ciRS-7对胰腺癌细胞糖酵解代谢的影响及其可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 细胞培养及外泌体制备 人胰腺癌细胞PANC-1购自中国科学院(上海)；胰腺癌CAFs取自手术采集的新鲜胰腺癌组织，用差速贴壁法分离、纯化后获得胰腺癌CAFs，并进行细胞鉴定。PANC-1、CAFs细胞培养于含10%去外泌体胎牛血清的DMEM培养基中，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养，待细胞融合至75%～80%时，用胰酶消化、传代培养。取对数期CAFs细胞接种到6孔板，每孔5×105个细胞，24 h后细胞使用LipofectamineTM3000转染试剂，将敲降质粒siRNA-ciRS-7、过表达质粒EgciRS-7及对照质粒转染至CAFs细胞(质粒构建参考文献[8]) ......