周蓓蓓，王凌波，张秀彩，陈栎江，王忠永，周铁丽

    1.温州医科大学附属第一医院 医学检验中心 浙江省检验诊断及转化研究重点实验室，浙江 温州 325015；2.浙江大学医学院附属儿童医院 实验检验中心，浙江 杭州 310052

    铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种能引起多部位感染的人类常见机会致病菌，可以导致肺部、尿路、烧伤创面和糖尿病足等多种感染[1]。研究显示，由铜绿假单胞菌导致的感染在院内感染中呈不断上升的趋势，且多重耐药铜绿假单胞菌日益增加，限制了抗菌药物的治疗选择[2-3]。 铜绿假单胞菌具有多种促进感染发生发展的毒力因素，其中分泌系统是重要的毒力因素之一，细菌可以通过分泌系统获取营养成分，向外界环境分泌毒素蛋白，或者直接作用于真核生物的作用靶点发挥致病性[4]。较多研究表明[5-6]，III型分泌系统(type III secretion system, T3SS)在临床上常与严重感染相关，铜绿假单胞菌可通过T3SS将分泌蛋白注入宿主细胞；VI型分泌系统(type VI secretion system, T6SS)是铜绿假单胞菌的另一分泌系统，可编码3个T6SS分泌系统(H1-、H2-和H3-T6SS)[7]。目前有较多国内外报道对临床菌株T3SS毒力因子的流行和作用进行探究，但T6SS毒力因子的流行情况及特性仍未完全明确，并且最近发现的T6SS效应蛋白PldA、PldB具有较强的毒力效应，不仅可以竞争杀菌还可内化至非吞噬细胞[8]，因此对于T6SS相关因子携带率的检测和探究极为重要。另外BOULANT等[9]发现T3SS及T6SS相关因子在引起人类不同感染的铜绿假单胞菌中的携带具有一定的差异，而呼吸道和血液作为铜绿假单胞菌分离的两大标本来源，探究T3SS和T6SS效应基因与不同标本来源菌株之间的关系具有一定的临床意义。

    细菌耐药性和毒力特征是影响铜绿假单胞菌感染临床预后的关键因素，随着多重耐药铜绿假单胞菌在临床中的快速出现，迫切需要新的方法来治疗由铜绿假单胞菌引起的各种严重感染。毒力抑制策略是一种有潜力的策略，而了解临床菌株中编码毒力因子基因的分布情况是关键。本研究旨在通过检测痰液及血液来源标本中T3SS和T6SS效应蛋白相关基因的分布特性，并分析其与细菌耐药性的关系，为临床控制铜绿假单胞菌所致感染以及药物靶向治疗提供理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 菌株来源 收集2016年至2018年间分离自温州医科大学附属第一医院住院患者痰液和血液标本的铜绿假单胞菌共92株(剔除同一患者相同来源的重复菌株) ......