陈威，汪艳，金琼，黄慧

    1.温州医科大学附属口腔医院 儿童口腔科，浙江 温州 325000；2.温州医科大学附属口腔医院 种植科，浙江 温州 325000；3.上海交通大学附属第九人民医院 修复科，上海 200011

    本课题组前期体外实验结果证实了antagomir-30d正性调控大鼠骨髓基质干细胞的成骨分化作用[1]，针对这一研究成果，本研究拟建立体内实验动物模型，进一步验证miR-30d对成骨调控的作用。研究假设由骨生长调控因子miRNA、种子细胞骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)、生物支架材料磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement, CPC)构建的组织工程骨复合物可以用作理想的骨再生材料。实验中，我们将复合物植入到裸鼠皮下，并分别于植入后2周、4周、8周取出植入体。其中，2周的植入体用于抽提RNA进行RT-PCR检测，分析成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin, OC)和Runt相关转录因子2(Runtrelated transcription factor 2, RUNX2)mRNA水平的表达情况。植入后4周、8周的植入体取出进行苦味酸品红组织学染色和组织形态学计量观察分析新骨生成情况。实验通过构建骨重建调控因子antagomir-30d/种子细胞BMSCs/CPC支架材料组织工程骨复合物用于BALB/c裸鼠皮下异位成骨模型，探讨其与新生骨形成之间可能的联系，为深入研究miRNAs的功能及体内应用提供指导。

    1 材料和方法

    1.1 材料 8周龄SPF级BALB/c裸鼠15只，雄性，健康。所有动物及培养条件均由上海交通大学医学院附属第九人民医院动物实验中心提供，实验动物许可证号：SYXK(沪)2020-0025。多孔支架材料CPC，由上海瑞邦生物材料有限公司提供，孔径400～500 μm，孔隙率约为72%。成品为圆柱形外观，直径5 mm，高2 mm，经高温高压消毒备用。α-MEM培养基购自美国Invitrogen公司，胎牛血清购自美国Hyclone公司，SYBR?PrimeScript?RT-PCR Kit购自日本Takara公司，Superscript II反转录试剂盒购自日本Takara公司，RNAse Free Water购自美国Ambion公司，品红购自上海迈坤化工有限公司，苦味酸购自上海顺勃生物工程有限公司。

    1.2 大鼠BMSCs的获取和培养方法 大鼠脱臼处死 ......