水中跑台训练通过促进水通道蛋白4的极性表达减轻大鼠脊髓损伤后的组织水肿
星形,胶质,1材料和方法,2结果,3讨论
谢庆凤,谢媛媛,胡权,陈晓龙,林坚炜,应新旺温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 康复医学中心,浙江 温州 325027
脊髓水肿是继发性脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)的关键病理过程之一,对脊髓功能的预后恢复有重要影响[1-2]。目前治疗脊髓水肿的方法有限,主要针对破坏性水肿发展后的对症治疗,疗效欠佳[3]。因此,根据脊髓水肿的发生和发展规律采取相应的康复措施来抑制脊髓水肿发展并消退水肿至关重要。星形胶质细胞的基底膜、周细胞和末端足突构成血脊髓屏障(blood-spinal cord barrier, BSCB)系统,保护和调节脊髓实质[4-6]。水通道蛋白4(aquaporin 4, AQP4)广泛分布在中枢神经系统,是调节水通透性和水代谢的主要分子途径[7-8]。当血管源性水肿时,血管周围的星形胶质细胞终足膜上密集表达的AQP4在流体静力压的驱动下,介导水从细胞外间隙转运进毛细血管,加速水分清除,减轻水肿。这种细胞特定部位的表达形式称之为AQP4的极性表达[3,9]。运动疗法是目前临床上SCI后有效的康复措施之一[10-11]。由于大鼠SCI后不能进行正常的运动训练,本课题组将运动和水疗相结合,设计水中跑台进行训练来模拟临床上的运动疗法。本研究旨在探讨水中跑台训练(water treadmill training, TT)对大鼠SCI后脊髓水肿的作用机制。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物:80只清洁级2~3月龄SD大鼠,体质量220~250 g,购自北京维通利华实验动物有限公司,实验动物许可证号:SCXK(京)2012-0001。本研究已通过温州医科大学实验动物福利伦理委员会审批(编号:wydw2020-0602),符合实验动物伦理学要求。
1.1.2 试剂:AQP4抗体和CD31抗体(美国Affinity 公司);GFAP和Tubulin抗体(美国Abcam公司);山羊抗兔/山羊抗小鼠二抗(上海翌圣生物科技有限公司),EB染料试剂盒(上海雅吉生物科技有限公司),HE染色试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 大鼠的分组及处理:将大鼠按随机数字法分为假手术不处理组(Sham-Con)、假手术运动组(Sham-TT)、脊髓损伤组(SCI-Con)和脊髓损伤运动组(SCI-TT),每组各20只。
1.2.2 大鼠SCI模型制作:术前对大鼠进行24 h的空腹禁食处理。首先进行2%戊巴比妥钠(0.6 mL/100 g) 腹腔注射麻醉 ......
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