王荣跃，邱海凡，戴芬，楼文文，宫剑，谢爱兰

    温州医科大学附属第二医院，浙江 温州 325027，1.妇产科；2.检验医学科

    胎儿颈部淋巴水囊瘤(cystic hygroma, CH)是常见的一种严重先天性发育异常，多发生于早孕期，90%以上发生于颈部，主要临床特征是由于淋巴管发育异常导致软组织内出现单个或多个囊肿，其内含有透明或浑浊的液体。CH病因不明、预后评估困难且治疗效果差，目前比较公认的病理学说是淋巴管发育的紊乱或延迟[1]。Notch信号通路是一种进化保守的信号系统，在血管及淋巴管发育中发挥重要作用[2]。既往研究表明激活的Notch受体促进内皮细胞表达和分泌血管新生作用因子神经突起导向因子(netrin4, NTN4)[3]。现已证实NTN4能够直接刺激体外淋巴管生成，也能够增加淋巴管的通透性[4-5]。但其具体的调控机制尚不明确。鉴于此，本研究拟采用基因编辑技术引入Notch3敲入突变小鼠，探讨其在颈部CH中的发病机制研究。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 实验动物 C57BL/6小鼠和F2代Notch3基因敲入突变小鼠各10只，分别为对照组和突变组，雄性，SPF级，6～8周，体质量20～26 g，购自广州赛业生物有限公司，动物许可证为SCXK(苏)2018-0003。所有小鼠安置在温州医科大学动物实验中心饲养，饲养温度控制在22±2 ℃，相对湿度为40%±10%，室内光照维持12 h/12 h日夜交替，自由饮食，饲养2周熟悉环境后用于实验。本研究所采用动物实验方案通过温州医科大学实验动物伦理委员会审核(伦理编号：LCKY2019-231)。

    1.1.2 药品与试剂 苏木素染液(ZLI-9610，北京中衫金桥公司)；伊红染色液(G1100，美国Solarbio 公司)；Scott蓝化液(G1865，美国Solarbio公司)；改良Masson试剂盒(G1340，美国Solarbio公司)；血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)3抗体(AF4201，美国Affinity公司)；血管生成素2(angiopoietin 2,Ang2)抗体(12316-1-AP，美国Proteintech公司)；delta样配体4(delta-like ligand 4, DLL4)抗体(DF13221，美国Affinity公司)；发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1, Hes1)抗体(DF7569 ......