周 巍 周 剑

    (1.合肥市第二人民医院口腔科，安徽 合肥 230011；2.安徽医科大学第一附属医院骨科，安徽 230032)

    骨保护素转染犬骨髓基质细胞与聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物材料的体外生物相容性

    周 巍1周 剑2

    (1.合肥市第二人民医院口腔科，安徽 合肥 230011；2.安徽医科大学第一附属医院骨科，安徽 230032)

    目的 观察骨保护素(osteoprotegerin ，OPG)转染Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells ，BMSCs)与牙周组织工程技术相结合的可行性。方法 采用脂质体介导真核质粒载体pSecTag2/B-opg转染Beagle犬骨髓基质细胞12h，荧光免疫化学鉴定OPG蛋白表达效率，BMSCs与聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物共培养4h，倒置相差显微镜及扫描电镜下观察细胞在支架上的粘附、生长情况。结果 荧光免疫化学证实，转染细胞组的OPG较未转染细胞组表达明显增高(P1 材料与方法

    1.1 实验动物和材料、仪器 重组真核质粒pSecTag2/B-opg由安徽医科大学附属口腔医院实验室保存；限制性内切酶HindⅢ、EcoRⅠ、BamHⅠ购自大连生物公司；提取试剂盒购自美国Promega公司；Opti-MEM购自美国Gibco公司；胎牛血清购自四季青公司；；Lipofectamin2000阳离子脂质体转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；OPG抗体、β-actin抗体、荧光二抗购自美国博奥森公司；聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)购自山东医疗器械公司；显色试剂盒购自美国Pierce公司；荧光倒置显微镜显微镜日本Olympus公司；REVCO ELITE Ⅱ型CO2培养箱美国Asheville 公司、高速低温离心机购自美国Sigma公司。

    1.2 方法

    1.2.1 Beagle犬骨髓基质细胞的分离与培养 将Beagle犬静脉全麻(2%戊巴比妥钠，1ml/kg)，待麻醉效果良好后，于髂骨穿刺，套管抽取骨髓2～3ml，投入PBS缓冲液中立即送无菌室，在超净工作台上，骨髓由红细胞裂解液处理，低速离心5min后培养于含5%胎牛血清的DMEM培养液中，吹打均匀后放置细胞培养箱，培养条件为37℃，5%CO2,95%O2。第2d首次换液，以后每2～3d换液。待细胞局部密集成片时，加入胰蛋白酶消化液消化分散。当细胞铺满瓶底70～80%时，按1：2消化传代细胞。每天观察细胞形态变化及贴壁情况 ......