一种合成磁性物质的微好氧细菌的分离及高效半定量检测磁性物质方法的建立(2)
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进一步培养时的充氮气方法：在一135 ml的血清瓶中，加入108 ml蒸馏水，加海绵塞后灭菌。将瓶塞替换为橡胶血清瓶塞。在瓶塞上插入一个注射器针头以供排水，倒置血清瓶后向其中用另一个注射器针头注入使用0.22 μm微孔滤膜灭菌的高压氮气，直至蒸馏水完全排出。再向其中注入30 ml改良后培养基，并用石蜡封口膜包住橡胶血清瓶塞。所有操作在无菌条件下进行[13]。
所有培养基灭菌条件为120 ℃，20分钟。用于培养细菌的温度为28 ℃。
1.2.3 菌种的分离和纯化 样本在暗处室温静置1个月后，在瓶壁外对应于沉积物和水的界面处贴上一小磁铁，同时使其S极指向瓶壁，隔夜放置。吸取磁铁S极处约1 ml液体。液体中有肉眼可见的少量黑色颗粒。收集到的液体梯度稀释后涂于平板上。孵育约10天后出现菌落，挑取边缘不规则，周围半透明，中心白色的湿润圆形菌落，用接种针穿刺转接至试管中的半固体培养基中。为了进一步纯化菌株，同时保证所得菌株的遗传性状稳定，将该菌在平板和试管中的半固体培养基之间不断转接。分离和纯化阶段使用的培养基都为琼脂泥培养基。
1.2.4 磁性物质的检出 使用“悬滴法”结合磁铁检测是否存在磁性物质。待半固体培养基中的白线明显生成后，用刮刀刮去表面琼脂，挑取白线，加入2 mL离心管后，加入500 μl淤泥抽提液捣碎，转接至试管中的淤泥抽提液中。淤泥抽提液加至试管高度的2/3处。培养10天左右，摇匀后取一定量的液体培养物，用悬滴法在400倍显微镜下观察其中的颗粒，使用磁铁在载玻片附近吸引，同时不断改变磁铁方向。若观察到液体培养物中有颗粒随磁铁方向旋转，则认为产生了磁性物质。
1.2.5 ZS-3的形态观察 使用透射电子显微镜(TEM)对液体培养物中的ZS-3进行形态观察 ......
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