苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响(2)
1.2.2 细胞培养 用含10%胎牛血清的1640培养液,在37℃、5%CO2培养箱中进行HUVEC细胞培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况。待细胞浓度约90%时,去掉培养液,用PBS洗涤细胞三次,吸干瓶内液体,即加0.25%的胰酶溶液(以覆满瓶底为限)将贴壁细胞消化分离,后加入完全培养液,轻轻吹打均匀,使细胞彻底从培养瓶底壁脱落,按1:3比例进行传代培养。取对数生长期的细胞用于实验。1.2.3 细胞增殖的测定选 应用标准化MTT比色法,取对数生长期的HUVEC细胞,用含10%胎牛血清的1640培养液配制成5×103个/ml的细胞悬液,接种于96孔板中,每孔200μl。培养24h后加入不同浓度的苦碟子,使其终浓度分别为(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100)μl/ml,每个浓度设8个复孔。将0μ1/mL组作为本次实验的对照组,其他为实验组,此外,另设定不含有细胞、药物的空白对照组孔及不含细胞仅有药物的对照孔,进而排除由于药物因素对本次实验的结果影响。加药后分别培养24 h、48 h吸去原培养液,每孔加200μl无血清1640培养液及MTT20μl ......
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