王凌挺 徐宏光 王 弘 刘 平 陈学武 杨晓明 张 玙 李逸峰

    (皖南医学院附属弋矶山医院脊柱外科，芜湖市241001)

    椎间盘退变是导致腰腿痛疾病的主要原因，然而目前椎间盘退变机制尚不明确。终板软骨不仅能维持椎间盘结构完整性，而且软骨终板途径是椎间盘的重要营养通路，对椎间盘营养途径及形态维持都具有十分重要的作用，终板软骨退变可导致椎间盘退变[1，2]。因此，对终板软骨退变研究具有重要意义。

    Asporin是2001年在关节软骨和半月板中被发现的细胞外基质蛋白，该蛋白质在骨关节炎患者的关节软骨中大量表达且与骨关节的严重程度呈正相关[3]。Asporin基因位于染色体9q22.31，长约26 kb，包含8个外显子，编码含380个氨基酸残基的蛋白，其中包含一条由14个氨基酸残基组成的信号肽，1条由18个氨基酸残基组成的前肽，4个N末端半胱氨酸残基 (C-X3-C-X-X6-C)，10个LRR及2个C末端半胱氨酸残基[4]。

    骨关节炎病与椎间盘退变均为骨关节退变性疾病，Asporin基因不仅是骨关节炎发生的易感基因，而且是椎间盘退变发生的易感基因。目前研究表明退变椎间盘纤维环内Asporin蛋白表达明显增高，且与椎间盘退变程度呈正比。终板软骨内是否有Asporin蛋白表达及对椎间盘退变的有何影响目前研究甚少。本文旨在研究大鼠终板软骨细胞体外自然退变过程中Asporin基因的表达及意义。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    实验动物:10只清洁级 SD大鼠 (4周龄)，雌雄不限，体重 (100±20)g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号:SCXK(沪)2003-0002。

    试剂和仪器:胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶 (Sigma-Aldrich，美国);DMEM/F12(Hyclone，美国);胎牛血清 (Gibico，美国);细胞计数仪和TRIzol(Invitrogen， 美 国 ); Nano-Drop 2000(Thermo＆Scientific，美国);PCR反应体系和反转录试剂盒 (Fermentas，美国);PCR仪 (Eppendorf，德国);RealTime PCR kit(TOYOBO，中国);Real-Time PCR仪 (Roche LightCycler 480，德国)。Odyssey红外成像系统 (Li-Cor;英国)，ASPN抗体 (ab58741，abcam，美国)。

    1.2 方法

    大鼠原代终板软骨细胞的分离与培养:取10只SD大鼠 ......