王倩 王帅 徐仲阳 李咸周 邢宝华

    (山东省济宁市第一人民医院骨科，山东济宁 272011)

    构建韧带组织工程脱细胞支架的可行性研究

    王倩 王帅 徐仲阳 李咸周 邢宝华*

    (山东省济宁市第一人民医院骨科，山东济宁 272011)

    背景：十二烷基磺酸钠脱细胞在脱细胞的同时对支架结构存在一定的损伤，降低了支架的生物学性能；胰酶等脱细胞方法较为温和，虽最大程度保留支架结构与生物学性能，但脱细胞效果并不彻底。目的：制备并分析脱细胞牛肌腱作为组织工程韧带支架的可行性。方法：取新鲜小牛跟腱，通过物理法去除肌腱表面腱膜、滑膜及软组织，制备50个跟腱，随机分为两组，均行冻干处理。实验组以Triton X-100行脱细胞处理，对照组不予脱细胞处理。两组均以PBS冲洗后室温干燥备用。行组织学、DNA含量、细胞增殖、生物力学(最大应力、弹性模量以及刚度)检测，比较两组的差异。结果：对照组和实验组的DNA残留量分别为(0.34±0.15)μg/mg和(0.7±0.03)μg/mg，实验组显著低于对照组，差异有统计学意义(p<0.05)。实验组与对照组支架DNA含量对比显示，支架脱细胞效果彻底，无显著的免疫原性。两组在组织形态结构上无明显差异。细胞增殖显示脱细胞支架对细胞增殖无明显影响。实验组的最大应力小于对照组，弹性模量无统计学差异，刚度试验显示两组无明显差异。结论：脱细胞支架在保留天然支架生物学性能的基础上可作为组织工程支架的选择。

    组织工程韧带；免疫原性；组织相容性；脱细胞；肌腱

    脱细胞技术能保留韧带良好的生物力学特性，仿生三维结构，使得宿主对异体、异种韧带支架的免疫排斥显著降低[1,2]。脱细胞支架实质是细胞分泌的产物，组织或器官在其基础上形成。理想的脱细胞支架制备方法应既能有效去除组织中的细胞成分，最大程度降低材料的免疫原性，又能保留相对完整的三维支架结构，保持足够的生物力学强度，以满足组织修复重建的需要[3]。由于肌腱韧带的特殊性质及其高强度的工作环境，使得该方面的组织工程研究变得异常困难。

    脱细胞处理的典型方法包括在低渗盐水中广泛漂洗，用稀释的过氧乙酸(0.1%)处理或在Triton 100×中培育，然后用环氧乙烷或γ辐照消毒。这些方法已被证明可完全去除细胞成分，降解<300 bp的核酸碎片且保留生长因子如碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的生物活性[4-6]。除此之外，尚有胰酶、SDS、Triton X-100等脱细胞方法。胰酶脱细胞较为温和，但脱除腱膜等能力较弱，脱细胞不够彻底；SDS在脱除细胞的同时 ......