孙军营 林健静 栾昕宇 王方曦 李国庆 张卫飞 曾晖

    (北京大学深圳医院骨关节科，广东 深圳 518036)

    骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种常见的严重影响患者日常活动能力的慢性致残性疾病。流行病学调查结果显示，OA的发病主要集中在老年人群，随着年龄的增长，OA的发病率出现逐步递增的趋势[1,2]。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)调查和统计显示，全世界>50岁人群中约50%患有OA，而在>75岁人群中OA发病率为80%。在中国人口中，50岁以上人群中OA的发病率达60.70%，且这一数值以每年0.24%的速度急速攀升[3,4]。OA的发病与年龄因素高度相关，故老龄化被视为导致OA发生的最危险致病因素之一。

    沉默信息调节因子1(sirtuin type 1,Sirt1)作为Sir2的同源体，含一个高度保守的催化核心序列，广泛存在于哺乳动物染色质中，依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)[5]，能通过不同的分子信号通路参与机体代谢、延长寿命、控制细胞分化、增殖、凋亡及抑制炎症等生物反应[6,7]。白藜芦醇(resveratrol,Res)是一种多酚类化合物，可从植物中提取得到，是现阶段研究最广泛的Sirt1特异选择性激活剂，EX-527则是一种常用的Sirt1特异选择性抑制剂。目前，Sirt1在OA中的作用越来越受到人们关注。近来研究[7,8]发现，在OA累及的软骨中，Sirt1的表达降低，同样在Sirt1基因被敲除的小鼠中，OA的进展更快更严重。一系列研究表明，Sirt1能够延缓OA的发展，起重要的保护作用。但其具体的作用机制尚不十分明确。

    关节软骨退变和继发性骨质增生是OA的中心环节，而软骨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的异常改变是导致软骨退变的重要原因之一[9-12]。故本研究拟通过体外分离并培养小鼠的膝关节软骨细胞，分别加入Sirt1的激动剂和抑制剂，比较组别软骨细胞Sirt1表达和软骨细胞ECM合成及降解的情况，探究Sirt1对软骨细胞ECM的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料及主要试剂

    5日龄C57BL/6J小鼠(北京大学/香港科技大学医学中心，深圳医院实验动物中心)，细胞培养基的改进型1640(Hyclone公司)；牛血清白蛋白(BSA)、胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、胎牛血清(fetal bovine serun,FBS)(Gibco公司)，双抗(青霉素和链霉素)、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、白藜芦醇、EX-527、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)(Sigma公司)；TRE-trizol(Invitrogen公司) ......