于长水徐佳元 王春雷 陶学强

    (哈尔滨医科大学第一临床医学院骨科，哈尔滨150001)

    骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是一种原发性骨骼恶性肿瘤，其组织学特征是间充质来源的梭形细胞沉积未成熟的类骨质基质[1]。OS的美国年发病率为0.0031‰，是儿童骨骼中最常见的原发性恶性肿瘤[2]，具有极高的转移潜能。目前，新辅助化疗联合根治性手术可将OS的5年生存率提高至70%[3]，但化疗药物也带来了诸如骨髓抑制、肝肾功能损害等副作用，严重影响着患者的生存质量[4]。故临床上迫切需要新型的高效低副作用的抗OS药物。原花青素(proanthocyanidin,PC)是植物中广泛存在的一类多酚化合物的总称，由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，属于生物类黄酮，具有提高免疫、减轻机体损伤、抗氧化和抗炎等活性，且毒性更低[5-7]。1961首次从山楂新鲜果实的提取物中分离得到PC，后又相继在葡萄、花生、大黄、银杏等植物中发现，其中以葡萄籽和松树皮中含量最高。最新研究发现，葡萄籽PC能够抑制包括肺癌、肝癌、结肠癌等多种癌细胞的增殖，促进其凋亡，但其对于OS MG63细胞的作用及机制尚无相关研究报道[8-10]。本研究旨在探讨葡萄籽PC对OS MG63细胞的增殖抑制以及对其细胞周期的阻滞，为葡萄籽PC作为潜在的治疗OS药物提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与主要试剂

    人OS细胞株MG63(中国科学院上海细胞库)，葡萄籽PC(质量分数>950 g/L，广东方晟公司)，胎牛血清、胰蛋白酶、100×青/链霉素、高糖DMEM培养基(Gbico，美国)，MTT(Promega，美国)，细胞周期检测试剂盒(BD，美国)，一抗稀释液、二抗稀释液(碧云天，中国)，PVDF膜(Millipore，美国)，发光液(Thermo scientific，美国)，一抗兔抗人 cyclinA、cyclinB1、CDK1、CDK2、p21、p27(Cell Signaling Technology，美国)，辣根过氧化酶标记的二抗羊抗兔(Santa Cruz ......