史简铭 田进翔 辛超飞 龚汉普 常英健 李广恒 许建中

    (郑州大学第一附属医院骨科，郑州 450052)

    骨关节炎在60岁以上的老年人群中的发病率达10%，而软骨自我修复的能力非常有限，加之老龄化的加剧，骨关节炎在各国的发病率逐年上升[1]。目前骨关节炎早期的治疗措施主要包括抗炎药物的使用、关节腔使用润滑剂；骨关节炎后期的治疗主要为外科手术治疗。近年来动物实验和临床研究显示间充质干细胞在骨关节炎治疗上具有良好的应用前景[2-4]，间充质干细胞能够进行自我更新和具有多向分化的能力，而当前的研究中间充质干细胞的来源主要有骨髓源性干细胞、脂肪源性干细胞、滑膜源性干细胞等[5,6]。而骨髓源性干细胞的来源比较局限，取材时给患者造成一定创伤，且有感染的风险；脂肪源性干细胞虽来源丰富但其成软骨分化能力较弱，而近来研究虽然表明关节腔周围存在固有间充质干细胞，但是骨关节炎患者滑膜存在严重炎性改变，使其难以成为理想的来源[7]。本实验旨在探究鼠筋膜源性干细胞的分离，体外培养和鉴定，并在多向分化的潜能上进行研究，以明确筋膜源性干细胞是否具有诱导成软骨分化能力。

    1 材料与方法

    1.1 实验大鼠来源

    本实验所用大鼠软骨细胞和筋膜源性干细胞均由SD 大鼠体内分离所得，大鼠来源于北京维通利华有限公司【SCXK(京)2016-0011】。实验大鼠均为SPF级，8周龄，体重约240 g，实验过程中对动物的处置符合赫尔辛基宣言动物伦理学标准。

    1.2 主要试剂

    DMEM/F12培养基(Gibco，11330-032)，胎牛血清(Thermo Fisher，10099141)，Ⅱ型胶原酶(索莱宝，C8150)，胰酶(Thermo Fisher，25200056)PE标记的小鼠抗大鼠CD29 单克隆抗体(Thermo Fisher，25029180)、小鼠抗大鼠CD90 单克隆抗体(Thermo Fisher，12090081)，FITI标记的小鼠抗大鼠CD45单克隆抗体(Thermo Fisher，11046180)，APC 标记的小鼠抗大鼠CD71 单克隆抗体(Thermo Fisher，17071082)，BMP4(Peprotech，12005)、TGF-β3(Peprotech，10036E)，成脂诱导分化试剂盒(Cyagen，RASMD-90031)，成软骨诱导分化基础培养液(CCM005，R&D systems)，成软骨诱导分化添加剂(CCM020，R&D systems) ......