孙杰 万里 王俊

    (黄石市第二医院骨科,湖北黄石 435000)

    骨肉瘤是儿童和青少年最常见的骨肿瘤，死亡率高[1]。虽然在过去的几十年里研究人员花费了大量的努力，但是患者的总体存活率仍然不令人满意[2]。因此，了解骨肉瘤的发病机制对改善患者预后有重要意义。新的证据表明，非编码RNAs，如长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)、微小RNA(microRNAs，miRNAs/miR)等，在骨肉瘤的发病机制、诊断和预后调控中发挥重要作用[3]。lncRNAs是一类非蛋白编码转录产物，有多种生理和病理功能。miRNAs 是一类短链非编码RNA，通过诱导mRNA裂解或翻译抑制来调控基因表达，有高度保守性。同时，lncRNAs 通常通过海绵miRNAs 在各种疾病中发挥作用[4]。根据报道，lncRNA淋巴样增强因子1反义RNA 1(lymphoid enhancer-binding factor 1 anti?sense RNA 1,LEF1-AS1)在非小细胞肺癌组织中表达上调，并可促进癌细胞在体内和体外的增殖和迁移[5]，LEF1-AS1 在口腔鳞状细胞癌组织和细胞系中高表达，发挥致癌作用[6]。前列腺癌中的LEF1-AS1表达上调，沉默的LEF1-AS1 抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力[7]。miR-339-5p 在骨肉瘤细胞中显著降低，并且其过表达可抑制骨肉瘤增殖，lncRNA核富含丰富的转录本1(nuclear paraspeckle assembly tran?script 1,NEAT1)通过抑制miR-339-5p而在骨肉瘤中充当癌基因[8]。然而LEF1-AS1在骨肉瘤中的生物学意义及机制尚不清楚。本研究旨在考察LEF1-AS1和miR-339-5p 在骨肉瘤组织中的表达，探讨LEF1-AS1 和miR-339-5p 在骨肉瘤U2OS 细胞增殖与凋亡中的生物学功能，以及LEF1-AS1 的分子调控机制，这可能有助于骨肉瘤的早期诊断和靶向治疗。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂

    人骨肉瘤细胞U2OS 购自中国科学院上海细胞生物学研究所，DMEM 培养基购自美国Gibco 公司，实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)相关试剂盒购自日本TaKa?Ra公司，细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)购自日本Dojindo 公司 ......