解笑宸 于斐 姚粤峰 林健静 年梦圆 曾晖

    (北京大学深圳医院骨关节科，骨科生物材料国家地方联合工程研究中心，广东深圳 518036)

    第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chro?mosome 10,PTEN)，位于人染色体10q23.3[1]，是一个由8个内含子和9个外显子构成的200 kb的基因，是继p53基因后研究较多的一种具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，与肿瘤发生密切相关[2]。其翻译后产生的蛋白质属于酪氨酸磷酸酶家族成员，分子量58～60 kDa，由N末端、C2结构域及C末端组成[3]。PTEN基因的最初发现是因为其通过磷酸酯酶作用行使抑癌基因的功能，从而调控细胞周期，影响到细胞的生长与分裂，并抑制其过快的增殖分裂[4]。随着研究的深入，研究者发现PTEN基因在骨关节炎[5]、周围神经损伤[6]、骨肉瘤[7]及软骨发育不全[8]等疾病中起重要作用，其可以通过Wnt[9]、PI3K/AKT[10]、NF-κB[11]等信号转导通路影响机体中细胞炎性因子相关免疫反应[12]、细胞凋亡[13]、神经元轴突再生[14]等过程参与到骨科疾病[15]的病理生理过程中，也因此PTEN基因受到骨科医师的重视。

    RSC96施万细胞系是由原代培养的大鼠施万细胞经过长时间培养后自发转化形成的，传代次数较多，该细胞在特定因子的刺激下能够表现出原代施万细胞的特性，并且能够快速的分裂增殖，满足细胞实验中细胞量使用较大的需求，在创伤骨科、脊柱外科等领域的神经相关疾病的研究中应用广泛[16,17]，比如在脊髓损伤[18]、周围神经缺损[19]研究中受到青睐。

    目前，慢病毒转染敲减细胞中的基因表达是研究中比较新颖并且可靠的方法。通过细胞模型的建立，能够在细胞层面结合功能及机制检测方法解释疾病发生发展的原因，从而为实验研究提供便利，为临床治疗提供相应靶点。查阅文献发现，PTEN基因表达降低的RSC96施万细胞系模型鲜有报道，通过建立该细胞模型，结合细胞系可以多次传代的优势，我们可以在施万细胞系中探讨PTEN基因敲减通过相关信号通路如PI3K/AKT/mTOR、wnt/β-catenin等影响施万细胞的增殖及凋亡情况，进而解释脊髓损伤、周围神经缺损的发生发展原因，寻找促进损伤修复的方法及可能机制。因此，本研究应用慢病毒转染技术敲低了RSC96施万细胞系中PTEN基因的表达，为研究骨科疾病提供方法学基础。

    1 材料与方法 ......