自噬对糖皮质激素作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响*
小体,孵育,1材料与方法,1仪器与材料,2MC3T3-E1成骨细胞培养,3实验方法,4统计学方法,2结果,1MC3T3-E1成骨细胞培养结果,2不同浓度DXMS对成骨细胞增殖能力的影响,3不同浓度DX
陈俊名 刘又文 张虹 何沛霖 曹国瑞 毛骁 童培建 岳辰,4**(1.福建中医药大学中医骨伤及运动康复教育部重点实验室,福建福州 350122;2.河南省洛阳正骨医院河南省骨科医院髋部损伤科,河南洛阳 471002;3.浙江中医药大学附属第一医院骨伤科,杭州 310006;4.浙江中医药大学,杭州 310053)
激素性股骨头坏死(glucocorticoid-induced osteonecrosis of femoral head,GONFH)是骨科常见疾病,超剂量应用糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)是其病因[1,2]。针对GONFH,目前尚缺乏有效的治疗方法,明确其发病机制和早期预防一直是研究重点。目前有研究表明,GONFH的发生发展与细胞自噬密切相关[3,4]。
自噬是细胞吞噬自身受损蛋白或细胞器并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解并重新再利用的过程[5]在维持细胞稳态、抑制凋亡、促进细胞发挥正常功能方面具有重要作用[5-7]。自噬是细胞自我保护行为,但研究发现过度激活自噬可能抑制细胞生物学功能,加速细胞死亡[8,9]。一方面,过度激活的自噬是促进成骨细胞凋亡的原因之一,抑制自噬可减轻GCs引起的细胞损伤[3];另一方面,有研究认为自噬对GCs作用下的成骨细胞起保护作用,提高自噬水平能够有效减少GCs 作用下的成骨细胞凋亡、提高成骨活性[4]。GCs作用下成骨细胞自噬与其生物活性间的关系目前尚存争议。本研究以MC3T3-E1 小鼠成骨细胞为研究对象,探讨GCs对成骨细胞自噬以及GCs作用下自噬对成骨细胞增殖能力的影响,为从细胞自噬角度阐述GONFH的发病机理提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
0.25%胰蛋白酶、DMEM 高糖培养基(Gibco,美国),1%青链霉素,10%胎牛血清(HyClone,美国),地塞米松(dexamethasone,DXMS)(索莱宝,中国),雷帕霉素(Selleck,美国),CCK-8 细胞增殖-毒性检测试剂盒(东仁,日本),酶标仪(Thermo,美国),PAGE 凝胶快速制备试剂盒(雅酶,中国),LC-3B 兔单克隆抗体(CST,美国)、Beclin-1 兔单克隆抗体(CST,美国)、β-Actin 兔单克隆抗体(CST,美国),FITC 标记山羊抗兔IgG、罗丹明标记山羊抗兔IgG(中杉金桥,中国),812 环氧树脂包埋套装、醋酸双氧铀、柠檬酸铅染液(中镜科仪,中国)、正置荧光显微镜(Olympus ......
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