microRNA—373在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
[摘要]目的：探讨微小RNA(miR-373)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应检测64例乳腺癌患者癌组织标本及其对应的癌旁组织标本中miR-373的表达情况，分析其与乳腺癌的临床病理特征关系与诊断价值。结果：miR-373在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)；且miR-373的表达水平与淋巴结转移以及Her2表达情况明显相关(P<0.05)；ROC分析发现曲线下面积(AUC)为0.696。结论：miR-373可作为乳腺癌诊断的一个潜在的新型生物标志物。
[关键词]MicmRNA-373；乳腺癌；表达
乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤。寻找有效的肿瘤分子诊断标志物是提高其诊治水平的关键方法之一。研究证实，微小RNA(miRNA)的异常表达与人类肿瘤的发生、进展密切相关。miRNA是一类长度约为22nt的单链非编码RNA，能特异识别结合靶基因的mRNA，促其降解或抑制其转录活性发生，从而参与多种重要的生理和病理过程。本研究通过研究乳腺癌组织中miR-373的表达情况，旨在了解其表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性及诊断意义。
1材料与方法
1.1临床标本
收集2012年9月至2016年9月经附属医院确诊的64例乳腺癌患者肿瘤标本，并取距肿瘤组织至少5cm的癌旁组织作为对照。患者年龄39～68岁，平均年龄(51.6±10.7)岁。所有患者经手术前均未行放、化疗，并签署知情同意书。
1.2方法
1.2.1RNA提取 应用北京天根RNA提取试剂盒提取癌组织和癌旁组织的总RNA，其操作按提取操作说明进行。Nanodrop 2000测定RNA的浓度和纯度。
1.2.2cDNA逆转录及实时聚合酶链反应 采用Thermo Scientific公司的RevertAidTM First Strand cDNASynthesis试剂盒按照操作说明进行cDNA合成。应用SYBR Green试剂盒进行实事荧光定量PCR扩增，反应体系：2×FastStart Universal SYBR Green Master 5μL，primer(5ffM)0.8μL，ddH20 3.2μL，cDNA 1μL。反应条件：95～C预热5min，95℃ 20s变性，60℃ 1min退火，72℃ 30s延伸，40个循环。以U6作为内参。以上序列均由广州锐博生物科技有限公司合成，采用2-△△Ct的方法计算miR-373的相对表达量。
1.3统计学分析
采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。计量数据以平均数±标准差(x±s)表示，样本均数问的两两比较用t检验，计数资料采用x2检验；miR-373对乳腺癌的诊断效能以受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线来描述。P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1MiR-373在乳腺癌组织中的表达
检测发现miR-373在肿瘤组织中的相对表达量为(3.62±2.14)，在癌旁组织表达量为(2.07±1.77)，两组比较，差异有统计学意义(t=4.46，P
2.2MiR-373表达与乳腺癌患者临床病理特征关系
定义2-AACt≤1为低表达，2-AACt>1为高表达。分析发现，39例Her2阳性患者中，18例患者为miR-373高表达，而25例Her2阴性患者中，19例患者为miR-373高表达，两组比较，差异有统计学意义(x2=5.56，P=0.018)；27例淋巴结转移患者中，23例患者miR-373的表达水平为高表达，而37例无淋巴结转移患者中，18例患者为miR-373高表达，两组比较，差异有统计学意义(x2=9.05，P=0.003)。同时分析发现，miR-373在不同年龄、肿瘤分期、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)表达水平的患者癌组织中的表达情况无差异。
2.3miR-373对乳腺癌的诊断价值
通过ROC曲线分析发现，ROC曲线下面积(AUC)为0.696；灵敏性和特异性分别是77.5%和65%。
3讨论
现在认为，肿瘤的发生发展其过程存在多种miRNAs的异常表达。在乳腺癌的研究中，多个miRNAs被发现参与肿瘤的多种重要的生理过程。其中，作为miRNAs-371-372-373家族的成员之一，定位于染色体19q13.42的miR-373被认为是一种潜在的癌基因，与乳腺癌多种生物学行为关系密切。
在本研究中，我们通过检测miR-373在乳腺癌组织中的表达水平，结果表明，其在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)，进一步验证miR-373在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用，可能发挥着原癌基因的作用。通过miR-373的表达与临床病理特征的相关性分析发现：其表达与患者年龄、肿瘤分期、ER以及PR表达水平差异不具有相关性(P>0.05)，与陈梦婷等的研究一致，说明miR-373表达水平改变独立于这些病理学参数的改变，尤其与患者年龄以及肿瘤分期无明显相关，提示其异常改变可能发生在乳腺癌的发展早期，可作为潜在的早期诊断指标。但是，miR-373表达水平与Her2表达具有相关性，且Her2阴性患者的表达水平高于阳性患者。与Corinna等的研究一致，提示miR-373表达可能有助于反映乳腺癌亚型之问生物学上的差异。同时结果显示在发生淋巴结转移患者中的miR-373的表达高于无转移患者(P<0.05)，进一步证实miR-373是一种与乳腺癌转移潜能相关的分子，提示miR-373可能具有监测乳腺癌患者淋巴结转移的潜能。其机制可能是miR-373能抑制CD44、ITGA2以及硫氧还蛋白互作蛋白(TX-NIP)等与肿瘤转移相关的分子的表达，直接或间接作用相关的信号转导通路，从而影响肿瘤的转移浸润。通过ROC曲线分析进一步研究发现miR-373诊断乳腺癌的AUC值为0.696，表明其在乳腺癌的诊断中具有一定价值。
总之，本研究表明miR-373在乳腺癌中呈現高表达状态，并可作为乳腺癌的新型诊断靶标，为进一步研究提供了线索，但其分子机理还需要进一步研究。, http://www.100md.com(李子博 周江)
[关键词]MicmRNA-373；乳腺癌；表达
乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤。寻找有效的肿瘤分子诊断标志物是提高其诊治水平的关键方法之一。研究证实，微小RNA(miRNA)的异常表达与人类肿瘤的发生、进展密切相关。miRNA是一类长度约为22nt的单链非编码RNA，能特异识别结合靶基因的mRNA，促其降解或抑制其转录活性发生，从而参与多种重要的生理和病理过程。本研究通过研究乳腺癌组织中miR-373的表达情况，旨在了解其表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性及诊断意义。
1材料与方法
1.1临床标本
收集2012年9月至2016年9月经附属医院确诊的64例乳腺癌患者肿瘤标本，并取距肿瘤组织至少5cm的癌旁组织作为对照。患者年龄39～68岁，平均年龄(51.6±10.7)岁。所有患者经手术前均未行放、化疗，并签署知情同意书。
1.2方法
1.2.1RNA提取 应用北京天根RNA提取试剂盒提取癌组织和癌旁组织的总RNA，其操作按提取操作说明进行。Nanodrop 2000测定RNA的浓度和纯度。
1.2.2cDNA逆转录及实时聚合酶链反应 采用Thermo Scientific公司的RevertAidTM First Strand cDNASynthesis试剂盒按照操作说明进行cDNA合成。应用SYBR Green试剂盒进行实事荧光定量PCR扩增，反应体系：2×FastStart Universal SYBR Green Master 5μL，primer(5ffM)0.8μL，ddH20 3.2μL，cDNA 1μL。反应条件：95～C预热5min，95℃ 20s变性，60℃ 1min退火，72℃ 30s延伸，40个循环。以U6作为内参。以上序列均由广州锐博生物科技有限公司合成，采用2-△△Ct的方法计算miR-373的相对表达量。
1.3统计学分析
采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。计量数据以平均数±标准差(x±s)表示，样本均数问的两两比较用t检验，计数资料采用x2检验；miR-373对乳腺癌的诊断效能以受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线来描述。P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1MiR-373在乳腺癌组织中的表达
检测发现miR-373在肿瘤组织中的相对表达量为(3.62±2.14)，在癌旁组织表达量为(2.07±1.77)，两组比较，差异有统计学意义(t=4.46，P
2.2MiR-373表达与乳腺癌患者临床病理特征关系
定义2-AACt≤1为低表达，2-AACt>1为高表达。分析发现，39例Her2阳性患者中，18例患者为miR-373高表达，而25例Her2阴性患者中，19例患者为miR-373高表达，两组比较，差异有统计学意义(x2=5.56，P=0.018)；27例淋巴结转移患者中，23例患者miR-373的表达水平为高表达，而37例无淋巴结转移患者中，18例患者为miR-373高表达，两组比较，差异有统计学意义(x2=9.05，P=0.003)。同时分析发现，miR-373在不同年龄、肿瘤分期、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)表达水平的患者癌组织中的表达情况无差异。
2.3miR-373对乳腺癌的诊断价值
通过ROC曲线分析发现，ROC曲线下面积(AUC)为0.696；灵敏性和特异性分别是77.5%和65%。
3讨论
现在认为，肿瘤的发生发展其过程存在多种miRNAs的异常表达。在乳腺癌的研究中，多个miRNAs被发现参与肿瘤的多种重要的生理过程。其中，作为miRNAs-371-372-373家族的成员之一，定位于染色体19q13.42的miR-373被认为是一种潜在的癌基因，与乳腺癌多种生物学行为关系密切。
在本研究中，我们通过检测miR-373在乳腺癌组织中的表达水平，结果表明，其在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)，进一步验证miR-373在乳腺癌的发生发展中起着重要的作用，可能发挥着原癌基因的作用。通过miR-373的表达与临床病理特征的相关性分析发现：其表达与患者年龄、肿瘤分期、ER以及PR表达水平差异不具有相关性(P>0.05)，与陈梦婷等的研究一致，说明miR-373表达水平改变独立于这些病理学参数的改变，尤其与患者年龄以及肿瘤分期无明显相关，提示其异常改变可能发生在乳腺癌的发展早期，可作为潜在的早期诊断指标。但是，miR-373表达水平与Her2表达具有相关性，且Her2阴性患者的表达水平高于阳性患者。与Corinna等的研究一致，提示miR-373表达可能有助于反映乳腺癌亚型之问生物学上的差异。同时结果显示在发生淋巴结转移患者中的miR-373的表达高于无转移患者(P<0.05)，进一步证实miR-373是一种与乳腺癌转移潜能相关的分子，提示miR-373可能具有监测乳腺癌患者淋巴结转移的潜能。其机制可能是miR-373能抑制CD44、ITGA2以及硫氧还蛋白互作蛋白(TX-NIP)等与肿瘤转移相关的分子的表达，直接或间接作用相关的信号转导通路，从而影响肿瘤的转移浸润。通过ROC曲线分析进一步研究发现miR-373诊断乳腺癌的AUC值为0.696，表明其在乳腺癌的诊断中具有一定价值。
总之，本研究表明miR-373在乳腺癌中呈現高表达状态，并可作为乳腺癌的新型诊断靶标，为进一步研究提供了线索，但其分子机理还需要进一步研究。, http://www.100md.com(李子博 周江)