TGF—β、PDGF在子宫内膜异位症患者异位组织中的表达及意义
[摘要]目的：对子宫内膜异位症患者异位组织中TGF-β、PDGF的表达情况进行探讨。方法：选取30例子宫内膜异位症患者进行实验分析，将其设定为异位内膜组，均为我院2014年至2015年间所接收的患者，为了保证实验结果的公平性和有效性，同期选取30例健康体检者进行实验分析，将其设定为对照组，对所有对象均采用免疫组织化学法实施检测，观察并对比两组人员内膜组织中TGF-β和PDGF的表达情况。结果：对于TGF-β的表达情况进行对比，异位内膜组的表达显著高于对照组(P<0.05)；PDGF在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达高于对照组(P<0.05)。结论：子宫内膜异位症的发生发展与TGF-β和PIX3F的异常表达有密切的关系。
[关键词]子宫内膜异位症；转化生长因子-β(TGF-β)；血小板衍生生长因子(PDGF)；免疫组织化学
具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫内膜及子宫肌层以外的部分时，称为子宫内膜异位症(EMs)。子宫内膜异位症属于临床妇科的常见病种，其多发病群是生育年龄妇女，若不及时对该病治疗或干预，病情不断进展，会给患者造成不孕不育，严重影响生命健康和生活质量。该病的症状与体征及疾病的严重性不成比例，病变形态多样，具有浸润性，可形成广泛、严重的粘连，其发生、发展具有雌激素依赖性，并受多种细胞因子及免疫因子的影响。本研究通过检测转化生长因子及血小板衍生生长因子在EMs患者异位內膜及正常内膜组织的表达，探讨其与EMs发生、发展的关系，以期为临床治疗内异症提供思路。
1资料与方法
1.1临床资料
选取我院2014年至2015年间收治的共30例子宫内膜异位症患者作为研究对象，将其设定为异位内膜组，入院时均依据临床表现，参照美国生育协会(AFS)制定的子宫内膜异位症分期诊断标准，确诊为子宫内膜异位症Ⅲ～Ⅳ期患者。同期选取同期30例来我院体检的健康人作为对照组。1)异位内膜组30例：纳入标准：所有患者留取的异位内膜经术后病理检查，证实为子宫内膜异位症；所有患者在半年内均未接受过激素治疗，且无内外科合并症；同期接受宫腔镜检查术治疗的患者，术后病理检查，证实为良性子宫内膜。排除：子宫发育异常，近期内使用过激素或者其他会对月经周期产生影响的药物。按照病理分析，其中腹壁切口子宫内膜异位症患者和卵巢子宫内膜异位囊肿患者分别占6例、24例，年龄26～46岁，平均年龄(36.4±5.7)岁。每例选择1块蜡块组织。2)对照组30例：年龄38～50岁，平均年龄(37.3±5.4)岁。
两组研究对象在接受检测前均与我院签署《实验知情同意书》，均排除患有肝肾功能不全、血液疾病等患者。
1.2试剂
兔抗TGF-β1抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司，兔抗PDGF抗体购自北京中杉金桥生物技术公司。
1.3方法
分别以SABC免疫组化法检测组织中TGF-β的表达，操作步骤严格按说明书进行，DAB显色，苏木精复染。
PDGF检测：患者月经干净后5～7d进行手术，术前刮宫，留取患处的异位内膜，内膜取出后立即以预冷好的0.9%氯化钠进行漂洗，连续对其漂洗3次后，置入冷藏管，于冰箱内备用，注意冰箱内的温度应控制在-80℃。检测时，取出备用组织，以氯化钠液洗涤，滤纸吸干，以匀浆机碾磨，转速300r/min，碾磨5分钟，之后进行离心处理15min，转速10000r/min。取上层清液进行PDGF检测，之后采用应用酶联免疫吸附法测量PDGF值。
1.4观察指标
1)观察比较两组子宫内膜中TGF-β的表达情况；2)观察比较两组子宫内膜中PDGF的表达情况。
1.5结果判定
细胞浆中出现棕黄色或褐色颗粒者判为阳性。根据阳性细胞的百分率及显色深浅分级：1)阳性细胞百分率：0表示没有细胞显色；2表示25%～50%的细胞显色；3表示50%以上的细胞显色。2)显色深浅：3表示细胞显色为深褐色；2表示细胞显色为棕黄色；1表示细胞显色为浅黄色；0表示细胞显色效果不明显或无任何显色。二项乘积：大于5分(卅)：表示强阳性；4～5分之间(++)：表示中度阳性，2～3分(+)：表示弱阳性，0～1分(-)：表示为阴性。
1.5统计学方法
应用统计学软件SPSS 23.0处理本次数据，采用(x±s)表示计量资料，对照比较采用t检验；计数资料以率(%)为单位，比较采用x2检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1两组子宫内膜中TGF-β的表达情况
TGF-β在子宫内膜的腺上皮细胞及间质细胞中均有表达，其主要定位在细胞浆，染色呈棕黄色或棕褐色。TGF-β在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达显著高于对照组(P<0.05)。详见表1。
2.2两组子宫内膜中PDGF的表达情况
PDGF主要表达在子宫内膜间质细胞中，为间质细胞的促有丝分裂及趋化因子。PDGF在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达高于对照组(P<0.05)。详见表2。
3讨论
EMs虽为良性病变，但其恶性行为主要表现在：增长速度过快，转移可能性大，局部浸润、血管再生、发病灶等。微血管的生成与肿瘤的发生、生物学行为及免疫因素有着密切的关系，新生血供的建立和维持也是EMs种植存活和发展的基本条件，大量的基础和临床研究已证实了该观点。而抗新生血管生成的治疗方法也已广泛应用于临床上肿瘤的治疗，该类治疗是否可以应用到EMs的防治，亦需进一步的研究。
转化生长因子-β是一类具有多种生物功能的多肽类细胞因子，其通过参与调节细胞的增殖分化、细胞迁移、血管生成及免疫监视等影响了多种疾病的发生与发展。在肿瘤疾病方面的研究表明TGF-β通过增加血管的生成、抑制免疫功能、诱导细胞外基质的产生起到促进肿瘤的侵袭和转移的作用。另外TGF-β可通过多种途径促进子宫内膜异位病灶周围新生血管的形成，比如直接作用于内皮细胞和增加腹膜间皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达，进而为异位子宫内膜提供存活所需营养，并促进其增殖和浸润。同时TGF-β通过破坏腹膜表层结构的完整性、促进细胞外基质的沉积、纤维蛋白形成和纤维母细胞增生，致使腹膜纤维化或盆腔粘连形成，最终导致不孕症、慢性盆腔痛等并发症的发生。由此可见TGF-β参与了EMs发病“3A”程序的每个环节。
血小板源性生长因子(PDGF)是由血小板、组织细胞和某些肿瘤细胞产生的一种多肽类生长因子，它是多种间质细胞，能够促进自身增殖与分化。此外，PDGF对新生血管的形成有重要作用，主要表现在以下几个方面：首先，PDGF可诱导血管平滑肌细胞与内皮细胞迁移，并促进其更新换代和繁衍增殖，抑制其凋亡，促进微血管形成。其次，PDGF可促进间质细胞的生成，既能增加血管间质，又能刺激其分泌V型胶原，这些为新生的微血管创造了良好的条件。再次，PDGF可上调组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达，两者协同促进新生血管的形成。另外有研究发现，PDGF可促进雌二醇的产生，进而有利于异位子宫内膜的生长。笔者研究发现PDGF在异位子宫内膜中的表达高于对照组，说明子宫内膜异位病灶内生成较多PDGF，有利于病灶处新生血管的形成，进而为病变的进一步发展提供必要的营养支持。
综上所述，TGF-β、PDGF表达水平与EMs的发生发展有一定的关系，利用理化及生物等治疗手段抑制TGF-β及PDGF的表达或许可为EMs的治疗提供有效手段。, 百拇医药(杜长江 申庆文)
[关键词]子宫内膜异位症；转化生长因子-β(TGF-β)；血小板衍生生长因子(PDGF)；免疫组织化学
具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫内膜及子宫肌层以外的部分时，称为子宫内膜异位症(EMs)。子宫内膜异位症属于临床妇科的常见病种，其多发病群是生育年龄妇女，若不及时对该病治疗或干预，病情不断进展，会给患者造成不孕不育，严重影响生命健康和生活质量。该病的症状与体征及疾病的严重性不成比例，病变形态多样，具有浸润性，可形成广泛、严重的粘连，其发生、发展具有雌激素依赖性，并受多种细胞因子及免疫因子的影响。本研究通过检测转化生长因子及血小板衍生生长因子在EMs患者异位內膜及正常内膜组织的表达，探讨其与EMs发生、发展的关系，以期为临床治疗内异症提供思路。
1资料与方法
1.1临床资料
选取我院2014年至2015年间收治的共30例子宫内膜异位症患者作为研究对象，将其设定为异位内膜组，入院时均依据临床表现，参照美国生育协会(AFS)制定的子宫内膜异位症分期诊断标准，确诊为子宫内膜异位症Ⅲ～Ⅳ期患者。同期选取同期30例来我院体检的健康人作为对照组。1)异位内膜组30例：纳入标准：所有患者留取的异位内膜经术后病理检查，证实为子宫内膜异位症；所有患者在半年内均未接受过激素治疗，且无内外科合并症；同期接受宫腔镜检查术治疗的患者，术后病理检查，证实为良性子宫内膜。排除：子宫发育异常，近期内使用过激素或者其他会对月经周期产生影响的药物。按照病理分析，其中腹壁切口子宫内膜异位症患者和卵巢子宫内膜异位囊肿患者分别占6例、24例，年龄26～46岁，平均年龄(36.4±5.7)岁。每例选择1块蜡块组织。2)对照组30例：年龄38～50岁，平均年龄(37.3±5.4)岁。
两组研究对象在接受检测前均与我院签署《实验知情同意书》，均排除患有肝肾功能不全、血液疾病等患者。
1.2试剂
兔抗TGF-β1抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司，兔抗PDGF抗体购自北京中杉金桥生物技术公司。
1.3方法
分别以SABC免疫组化法检测组织中TGF-β的表达，操作步骤严格按说明书进行，DAB显色，苏木精复染。
PDGF检测：患者月经干净后5～7d进行手术，术前刮宫，留取患处的异位内膜，内膜取出后立即以预冷好的0.9%氯化钠进行漂洗，连续对其漂洗3次后，置入冷藏管，于冰箱内备用，注意冰箱内的温度应控制在-80℃。检测时，取出备用组织，以氯化钠液洗涤，滤纸吸干，以匀浆机碾磨，转速300r/min，碾磨5分钟，之后进行离心处理15min，转速10000r/min。取上层清液进行PDGF检测，之后采用应用酶联免疫吸附法测量PDGF值。
1.4观察指标
1)观察比较两组子宫内膜中TGF-β的表达情况；2)观察比较两组子宫内膜中PDGF的表达情况。
1.5结果判定
细胞浆中出现棕黄色或褐色颗粒者判为阳性。根据阳性细胞的百分率及显色深浅分级：1)阳性细胞百分率：0表示没有细胞显色；2表示25%～50%的细胞显色；3表示50%以上的细胞显色。2)显色深浅：3表示细胞显色为深褐色；2表示细胞显色为棕黄色；1表示细胞显色为浅黄色；0表示细胞显色效果不明显或无任何显色。二项乘积：大于5分(卅)：表示强阳性；4～5分之间(++)：表示中度阳性，2～3分(+)：表示弱阳性，0～1分(-)：表示为阴性。
1.5统计学方法
应用统计学软件SPSS 23.0处理本次数据，采用(x±s)表示计量资料，对照比较采用t检验；计数资料以率(%)为单位，比较采用x2检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1两组子宫内膜中TGF-β的表达情况
TGF-β在子宫内膜的腺上皮细胞及间质细胞中均有表达，其主要定位在细胞浆，染色呈棕黄色或棕褐色。TGF-β在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达显著高于对照组(P<0.05)。详见表1。
2.2两组子宫内膜中PDGF的表达情况
PDGF主要表达在子宫内膜间质细胞中，为间质细胞的促有丝分裂及趋化因子。PDGF在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达高于对照组(P<0.05)。详见表2。
3讨论
EMs虽为良性病变，但其恶性行为主要表现在：增长速度过快，转移可能性大，局部浸润、血管再生、发病灶等。微血管的生成与肿瘤的发生、生物学行为及免疫因素有着密切的关系，新生血供的建立和维持也是EMs种植存活和发展的基本条件，大量的基础和临床研究已证实了该观点。而抗新生血管生成的治疗方法也已广泛应用于临床上肿瘤的治疗，该类治疗是否可以应用到EMs的防治，亦需进一步的研究。
转化生长因子-β是一类具有多种生物功能的多肽类细胞因子，其通过参与调节细胞的增殖分化、细胞迁移、血管生成及免疫监视等影响了多种疾病的发生与发展。在肿瘤疾病方面的研究表明TGF-β通过增加血管的生成、抑制免疫功能、诱导细胞外基质的产生起到促进肿瘤的侵袭和转移的作用。另外TGF-β可通过多种途径促进子宫内膜异位病灶周围新生血管的形成，比如直接作用于内皮细胞和增加腹膜间皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达，进而为异位子宫内膜提供存活所需营养，并促进其增殖和浸润。同时TGF-β通过破坏腹膜表层结构的完整性、促进细胞外基质的沉积、纤维蛋白形成和纤维母细胞增生，致使腹膜纤维化或盆腔粘连形成，最终导致不孕症、慢性盆腔痛等并发症的发生。由此可见TGF-β参与了EMs发病“3A”程序的每个环节。
血小板源性生长因子(PDGF)是由血小板、组织细胞和某些肿瘤细胞产生的一种多肽类生长因子，它是多种间质细胞，能够促进自身增殖与分化。此外，PDGF对新生血管的形成有重要作用，主要表现在以下几个方面：首先，PDGF可诱导血管平滑肌细胞与内皮细胞迁移，并促进其更新换代和繁衍增殖，抑制其凋亡，促进微血管形成。其次，PDGF可促进间质细胞的生成，既能增加血管间质，又能刺激其分泌V型胶原，这些为新生的微血管创造了良好的条件。再次，PDGF可上调组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达，两者协同促进新生血管的形成。另外有研究发现，PDGF可促进雌二醇的产生，进而有利于异位子宫内膜的生长。笔者研究发现PDGF在异位子宫内膜中的表达高于对照组，说明子宫内膜异位病灶内生成较多PDGF，有利于病灶处新生血管的形成，进而为病变的进一步发展提供必要的营养支持。
综上所述，TGF-β、PDGF表达水平与EMs的发生发展有一定的关系，利用理化及生物等治疗手段抑制TGF-β及PDGF的表达或许可为EMs的治疗提供有效手段。, 百拇医药(杜长江 申庆文)
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