rs174561与结直肠癌发生发展的相关性研究(1)
【摘 要】目的：观察miRNA-SNP rs174561与结直肠癌发生发展的相关性。方法：检测549例结直肠癌患者的rs174561的基因型，再统计基因型与临床病理参数的相关性。结果：与C/C基因型相比，T基因携带者(T/T和T/C)的疾病易感性较高(OR=0.538)，肿瘤尺寸较小(OR=3.404)，pT3+pT4风险较低(OR=2.161)。C/C型患者的肿瘤尺寸最大(OR=2.167)，pT3+pT4风险最高(OR=1.891)。而C/T型患者的肿瘤尺寸最小(OR=0.224)，pT3+pT4风险最小(OR=0.752)。结论：rs174561与疾病易感性、肿瘤尺寸、肿瘤分期、肿瘤类型显著相关，可能成为预测结直肠癌发生的分子标志物。
【关键词】单核苷酸多态性；结直肠癌；临床病理；相关性
前言
结直肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤，其发病率居全球恶性肿瘤第三位，在中国其死亡率排名第五，而且患病率呈逐年上升趋势[1-2]。miRNA是非编码的单链RNA分子，参與细胞分化、调节、应激、凋亡等多个过程。单核苷酸的多态性(single nucleotide plymorphism， SNP)是指在基因水平上由单个核苷酸的置换、颠换、插入和缺失等突变而造成的DNA序列多态性[3]。本文对miRNA相关单核苷酸多态性(miRNA-SNP) rs174561与结直肠癌发生及临床病理参数的相关性进行了研究。
1 资料与方法
1.1患者选择
选择2013年5月-2015年1月至苏州大学各附属医院住院部的结直肠癌患者549例，收集患者外周血和临床病理参数。患者经病理组织学确诊，并排除有其他相关恶性肿瘤。
1.2全血DNA提取
首先取0.5ml抗凝全血，加入细胞裂解液混匀，使DNA充分裂解，再加入1ml无菌双蒸水混匀，离心3min(3000r/min)，取上清液，将DNA稀释缓冲液加入沉淀中，20%SDS，5M NaCl充分混匀，加入适量无菌双蒸水及酚-氯仿混合液，进行混合萃取，再离心分层，取水相转移至另外离心管，加入无水乙醇，析出NDA。将DNA采用离心方法分离，使用70%乙醇混合去盐，使用灭菌双蒸水溶解，最后对提取的DNA浓度进行测定。
1.3基因型测定
基因分型由华大基因科技有限公司完成。即以DNA为模板进行PCR扩增，扩增产物与8.5 U SAP酶37℃孵育40分钟，85℃孵育5分钟，热灭活。将单碱基引物加入到iPLEX反应体系中进行延伸，用树脂对单碱基延伸产物脱盐。样品从384孔板中转移到飞行时间质谱平台(MALDI-TOF)芯片上，由质谱仪检测，获取基因型数据。
1.4数据处理
用SPSS19.0统计学软件处理相关数据，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，并采用t检验，计数资料采用(n，%)表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 rs174561基因型与结直肠癌易感性之间关系
在隐性模型中，T基因携带者(T/T和T/C)的疾病易感性(85.9%vs76.7%)比C/C基因型高。详见表1。
2.2 rs174561与结直肠癌肿瘤大小的相关性
等显性模型中，C/T肿瘤尺寸最小(44.6%vs15.3%)，而C/C的尺寸最大(11.1%vs29.8%)。隐形模型中，T等位基因携带者的肿瘤尺寸(88.9%vs70.2%)比C/C型小。详见表2。
2.3 rs174561与结直肠癌肿瘤TNM分期的相关性
隐形模型中，T等位基因携带者(91.0%vs82.3%)的pT3+pT4风险比C/C型较低。详见表3。
2.4 rs174561与其他临床病理参数的相关性
rs174561 C/T型患者的肿瘤是浸润型的为37.3%，息肉型的为54.2%，溃疡型的为33.6%(P<0.05)。rs174561基因型与病理类型、远端转移、淋巴转移、浸润深度和分化程度等其他病理参数无相关性。
3 讨论
MiRNA-SNP rs174561是目前临床上研究较多的多态性，被认为与结直肠癌关系较为密切。Mohsen等[4]证实rs174561位于Pre-miRNA-1908的5’-UTR内，通过最小自由能(MFE)影响pre-miRNA-1908到成熟miRNA的处理过程。rs174561的多态性与胆固醇等多项临床代谢指标显著相关，而且T基因型与血清脂质和空腹血糖的增加相关。Mohsen等还通过全基因组关联研究(GWAS)筛选出miRNA-1908可能参与调控临床代谢指标的六个靶基因，其中OTX1[5]，SLC12A5[6]，EPHB3[7，8]与结直肠癌的发展及不良预后相关。但是目前rs174561在miR-1908调控靶基因的机制中发挥的作用还不清楚。
本次研究发现，T等位基因携带者的疾病易感性比C/C基因型高(OR=0.538)，肿瘤尺寸较小，pT3+pT4风险较低。C/C型患者的肿瘤尺寸最大(OR=2.167)，pT3+pT4风险最高(OR=1.891)。C/T型患者的肿瘤尺寸最小(OR=0.224)，pT3+pT4风险最小(OR=0.752)。
综上所述，miR-SNP rs174561的多态性与结直肠癌的发生发展密切相关，可能成为临床诊断新的标记物，能够为结直肠癌的预防提供新的方向，具有重要的研究价值。
参考文献：
[1]Ahmedin J， Freddie B， Melissa M， et al. Global cancer statistics[J].Ca Cancer J Clin， 2011， 61(2)： 69-90., http://www.100md.com(曹苏萍 汪维鹏)
【关键词】单核苷酸多态性；结直肠癌；临床病理；相关性
前言
结直肠癌是临床常见的消化道恶性肿瘤，其发病率居全球恶性肿瘤第三位，在中国其死亡率排名第五，而且患病率呈逐年上升趋势[1-2]。miRNA是非编码的单链RNA分子，参與细胞分化、调节、应激、凋亡等多个过程。单核苷酸的多态性(single nucleotide plymorphism， SNP)是指在基因水平上由单个核苷酸的置换、颠换、插入和缺失等突变而造成的DNA序列多态性[3]。本文对miRNA相关单核苷酸多态性(miRNA-SNP) rs174561与结直肠癌发生及临床病理参数的相关性进行了研究。
1 资料与方法
1.1患者选择
选择2013年5月-2015年1月至苏州大学各附属医院住院部的结直肠癌患者549例，收集患者外周血和临床病理参数。患者经病理组织学确诊，并排除有其他相关恶性肿瘤。
1.2全血DNA提取
首先取0.5ml抗凝全血，加入细胞裂解液混匀，使DNA充分裂解，再加入1ml无菌双蒸水混匀，离心3min(3000r/min)，取上清液，将DNA稀释缓冲液加入沉淀中，20%SDS，5M NaCl充分混匀，加入适量无菌双蒸水及酚-氯仿混合液，进行混合萃取，再离心分层，取水相转移至另外离心管，加入无水乙醇，析出NDA。将DNA采用离心方法分离，使用70%乙醇混合去盐，使用灭菌双蒸水溶解，最后对提取的DNA浓度进行测定。
1.3基因型测定
基因分型由华大基因科技有限公司完成。即以DNA为模板进行PCR扩增，扩增产物与8.5 U SAP酶37℃孵育40分钟，85℃孵育5分钟，热灭活。将单碱基引物加入到iPLEX反应体系中进行延伸，用树脂对单碱基延伸产物脱盐。样品从384孔板中转移到飞行时间质谱平台(MALDI-TOF)芯片上，由质谱仪检测，获取基因型数据。
1.4数据处理
用SPSS19.0统计学软件处理相关数据，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，并采用t检验，计数资料采用(n，%)表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 rs174561基因型与结直肠癌易感性之间关系
在隐性模型中，T基因携带者(T/T和T/C)的疾病易感性(85.9%vs76.7%)比C/C基因型高。详见表1。
2.2 rs174561与结直肠癌肿瘤大小的相关性
等显性模型中，C/T肿瘤尺寸最小(44.6%vs15.3%)，而C/C的尺寸最大(11.1%vs29.8%)。隐形模型中，T等位基因携带者的肿瘤尺寸(88.9%vs70.2%)比C/C型小。详见表2。
2.3 rs174561与结直肠癌肿瘤TNM分期的相关性
隐形模型中，T等位基因携带者(91.0%vs82.3%)的pT3+pT4风险比C/C型较低。详见表3。
2.4 rs174561与其他临床病理参数的相关性
rs174561 C/T型患者的肿瘤是浸润型的为37.3%，息肉型的为54.2%，溃疡型的为33.6%(P<0.05)。rs174561基因型与病理类型、远端转移、淋巴转移、浸润深度和分化程度等其他病理参数无相关性。
3 讨论
MiRNA-SNP rs174561是目前临床上研究较多的多态性，被认为与结直肠癌关系较为密切。Mohsen等[4]证实rs174561位于Pre-miRNA-1908的5’-UTR内，通过最小自由能(MFE)影响pre-miRNA-1908到成熟miRNA的处理过程。rs174561的多态性与胆固醇等多项临床代谢指标显著相关，而且T基因型与血清脂质和空腹血糖的增加相关。Mohsen等还通过全基因组关联研究(GWAS)筛选出miRNA-1908可能参与调控临床代谢指标的六个靶基因，其中OTX1[5]，SLC12A5[6]，EPHB3[7，8]与结直肠癌的发展及不良预后相关。但是目前rs174561在miR-1908调控靶基因的机制中发挥的作用还不清楚。
本次研究发现，T等位基因携带者的疾病易感性比C/C基因型高(OR=0.538)，肿瘤尺寸较小，pT3+pT4风险较低。C/C型患者的肿瘤尺寸最大(OR=2.167)，pT3+pT4风险最高(OR=1.891)。C/T型患者的肿瘤尺寸最小(OR=0.224)，pT3+pT4风险最小(OR=0.752)。
综上所述，miR-SNP rs174561的多态性与结直肠癌的发生发展密切相关，可能成为临床诊断新的标记物，能够为结直肠癌的预防提供新的方向，具有重要的研究价值。
参考文献：
[1]Ahmedin J， Freddie B， Melissa M， et al. Global cancer statistics[J].Ca Cancer J Clin， 2011， 61(2)： 69-90., http://www.100md.com(曹苏萍 汪维鹏)
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