1.2 基因及蛋白检测方法

    采用实时荧光定量PCR检测Cofilin-1和 EGFRvⅢ在肝癌组织标本中的表达 ；采用Western-blot检测各实验组Huh-7-EGFRvⅢ细胞中Cofilin-1蛋白的表达。

    1.3 转染后细胞的侵袭能力变化

    1.3.1体外细胞迁移实验

    在24孔培养板中加入含10%FBS的DMEM培养基，加入组织细胞，盖好培养板放置于5%CO2、37℃培养箱中孵育8h，加入500μL 4%多聚甲醛固定，1h后去除孔中液体，加入500μL0.1%结晶紫，30min后用PBS洗涤2遍，晾干，在倒置显微镜下观察，随机取5个高倍镜视野，拍照、计数。

    1.3.2体外细胞侵袭实验

    将待检组织制成2.5×106个/ml 的细胞悬液，取200μL细胞悬液加入24孔培养板，盖好培养板，培养板放置于5%CO2、37℃培养箱中孵育14h 。其他后续步骤同体外细胞迁移实验。

    1.4数据处理

    采用Excel表录入实验数据建立数据库，经数据清理后导入SPSS20.0，采用SPSS20.0统计软件进行数据分析。定量资料用均数±标准差(x±s)表示，组间均值的比较采用两独立样本t检验 ......