久 太，冯喜英，安文静，刘洪千

    (青海大学附属医院呼吸内科，西宁 810001)

    久太(1971～)，男，藏族，青海籍，副主任医师

    低氧下大鼠AQP5基因差异性表达※

    久太，冯喜英，安文静，刘洪千

    (青海大学附属医院呼吸内科，西宁 810001)

    摘要目的检测低氧下大鼠肺组织AQP5 表达水平的改变，探讨AQP5表达量变化与低氧下肺水肿发病的分子机制。方法构建低氧大鼠模型；采用荧光定量PCR技术检测低氧下大鼠肺组织中AQP5 mRNA表达水平；采用Western-Blot技术检测低氧下大鼠肺组织中AQP5 蛋白表达水平；并与平原对照组进行表达差异性比较。结果低氧组大鼠肺组织中AQP5 mRNA表达水平随着时间的延长升高，其中72 小时组 AQP5 mRNA表达水平达到最高，且差异极为显著(P1.1 实验动物

    清洁级雄性Wistar大鼠25只(购于兰州大学动物实验中心，合格证号：ZX-02014)，体重120～150 g。分笼饲养，自由饮水、进食。适应性饲养1周后采用随机数字表法分组，均分为5组，每组5只，分别为0小时组(平原对照组)、24小时组、72小时组、15天组和30天组。置于海拔 4500 m低压低氧舱(中航工业贵州风雷航空军械公司)。

    1.2 实验方法

    1.2.1AQP5 RT-PCR技术测定

    组织总RNA提取及cDNA合成：采用 Trizol(Invitrogen)法，按照试剂盒说明，提取大鼠肺组织总RNA，取4 μg总RNA用First Strand cDNA Synthesis kit(Thermo)将其反转为cDNAdi’yi’lian第一链冷冻保存。

    Real-time PCR 反应：cDNA 合成引物(QuantiTech Primer购自Qiagen公司)实时定量PCR使用引物列表如下，Real-time PCR反应，配置Real-time PCR反应体系，Real-time PCR仪上进行PCR反应。基因表达含量相对比较：各样品的目的基因和管家基因分别进行Real-time PCR反应 ......