唐超群，永 胜，朱徳锐，刘 静，双 杰

    (青海大学医学院)

    青海牧区57份自制牦牛乳制品中产EPS乳酸菌的分离鉴定及特性研究

    唐超群，永 胜，朱徳锐，刘 静，双 杰*

    (青海大学医学院)

    目的 从青海牧区牧民家庭自制牦牛乳制品(酸奶、曲拉)中分离产EPS乳酸菌，得到青海地区产EPS乳酸菌种群系统发育树，并鉴定高产EPS乳酸菌，为后期产EPS乳酸菌在乳品工业中的开发及利用提供理论基础。方法 随机采集样本，乳酸菌采用CaCO3的MRS平板法分离，以形态结合生化实验初筛，用分子生物学方法即16s rDNA序列测定、NCBI数据库BLAST比对，构建系统进化树，最终确定乳酸菌种属；用苯酚-硫酸法对乳酸菌进行多糖产量定量分析；用琼脂扩散法行抑菌试验。模拟体外胃肠道环境完成生长实验。结果 从57份样品中分离出纯菌种86株，生化试验结合16s rDNA分析确定乳酸菌菌株52株，归属于5个菌属，分别是嗜热乳酸链球菌(33株)、粪肠球菌(6株)、侧孢短芽孢杆菌(4株)、干酪乳杆菌(5株)、嗜酸乳杆菌(4株)；产EPS菌株为31株，以嗜热链球菌为主，EPS浓度为(16.09±5.39)mg/L，最高浓度达28.83 mg/L，产量最高的是嗜热链球菌，来自果洛州；抑菌试验中的52株乳酸菌菌株对四种致病菌均有抑制作用，排除强酸和H2O2干扰后，有部分菌株无抑菌圈，且所有菌株抑制病原菌生长的能力较弱。模拟胃肠道生存实验中，不同时间生存率有差异，χ2=247.87(秩和检验值=卡方值)，P1 材料与方法

    1.1 样品采集

    采集青海省四个牧区(果洛州、玉树州、黄南州、海北州)牧民家庭中的自制乳制品(曲拉、酸奶)于灭菌管中，密封好放入冰盒置冰箱(4℃)保存。

    1.2 主要试剂与仪器选择

    MRS(蛋白胨10.0g、肉膏10.0g、酵母浸粉5.0g、葡萄糖20.0g、磷酸氢二钾2.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、碳酸钙20.0g、乙酸钠5.0g、硫酸镁·7H2O 0.2g、硫酸锰·4H2O 0.05g、吐温80 1.0mL、ddH2O 1000mL)固体(琼脂15.0g)、液体(琼脂7.5g)培养基；细菌生理生化鉴定试剂盒(北京陆桥生物制剂公司)；细菌DNA提取试剂盒(上海赛百盛公司)。

    电子天平(PL203 Mettler To-ledo 公司)；小型高速冷冻离心机(5424型，德国Eppendorf公司)；PCR仪(TX-XP，杭州博日公司)；超纯水系统(HealForceEasy公司)；恒温培养箱(ZHWY-100B ......