王妍君，杨佳佳

    (1.青海大学附属医院肾病内科；2.青海大学医学院)

    热休克蛋白72在低氧环境下大鼠肾脏间质纤维化中的表达及意义*

    王妍君1，杨佳佳2

    (1.青海大学附属医院肾病内科；2.青海大学医学院)

    目的 探讨低氧环境下大鼠肾脏间质纤维化中热休克蛋白72(heat shock protein，HSP72)的表达及意义。方法 将雄性SD大鼠随机分为四组：常氧组(4只)、低氧组、低氧+溶剂对照组、低氧+槲皮素干预组(各12只)。于低压氧舱建立低氧动物模型，分别于第3、7、14 d处死各组大鼠。取肾脏组织，应用免疫印迹法(western blot)检测HSP72表达；采用免疫组化染色法比较各组HSP72蛋白在肾脏小管间质表达水平，了解各组肾小管间质病变程度与HSP72的关系。结果 与常氧组比较，低氧环境下各组HSP72在大鼠肾小管间质中表达增加，并且随着缺氧时间延长而增加，差异均有统计学意义(P1 对象与方法

    1.1 实验对象和分组情况

    3月龄健康雄性SD大鼠40只，体重(280～320)g，在青海大学医学院动物房中适应性喂养1 w。随机分为四组：常氧组(4只)、低氧组、低氧+溶剂对照组、低氧+槲皮素干预组(各12只)。常氧组于常规动物房饲养。余各组置低压氧舱(模拟海拔5000m低氧环境，氧浓度11.3%)，于第3、7、14 d处死各组大鼠，每次4只。取肾脏组织，应用免疫印迹法(western blot)检测HSP72表达。然后采用免疫组化染色法观察比较四组HSP72蛋白在肾脏小管间质表达，同时通过苏木素复染观察比较四组肾小管受损、肾间质纤维化程度。

    1.2 主要试剂及仪器

    小鼠抗HSP72单克隆抗体(abcom，美国)、兔抗GAPDH(abcom，美国)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗小鼠IgG(博士德生物)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG(博士德生物)、PI细胞裂解液(Keygen)、槲皮素(Sigma，美国)、蛋白标准分子量marker(Thermo，美国)、BCA蛋白定量试剂盒(Pierce公司，美国)、ECL发光试剂盒(Pierce公司，美国)、PVDF膜(Millipore，美国)、5×上样缓冲液(康为世纪，北京)、1×PBS(Solarbio，北京)、20×TBS(Solarbio，北京)、Tris-Hcl PH6.8/PH8.8(Solarbio，北京)、30%丙烯酰胺(Solarbio，北京)、Ttween 20(Biotopped ......