大鼠低氧性肺动脉高压肺血管重构模型的构建及肺组织中miR-34a的表达※
右心室,平滑肌,1材料与方法,1实验动物选择,2实验试剂及仪器选择,3低氧性肺动脉高压动物模型构建,4生理学和血流动力学指标的测定,5心脏重量,左右心室重量比的测定及取材,6大鼠肺组织的
马 兰,刘川川,周 振,宋泽青,刘 洁,格日力*(1.青海大学医学院高原医学研究中心,青海西宁810001;2.青海省高原医学应用基础重点实验室,青海西宁810001;3.青海大学医学院临床医学系,青海西宁810001)
低氧性肺动脉高压(Hypoxic Pulmonary Hypertension,HPH)是高原适应生理的重要表现,而显著的肺动脉高压又是慢性肺源性心脏病和各型高原病(高原肺水肿、高原红细胞增多症、高原心脏病等)发病的重要病理生理变化之一,是一种潜在的早期高原病,且病情越重,HPH越明显。在慢性HPH形成早期,肺血管收缩是主要因素,随着缺氧时间的延长,肺血管结构重建也参与其中,低氧性肺血管结构重建(hypoxic pulmonary vascular remodeling,HPVR)是慢性HPH的重要病理生理基础。然而,目前HPH的发病机制仍不清楚。
微小RNA(microRNA,miRNA)是一种长度只有~23nt的内源性非编码单链RNA,在动物种系发生中具有保守序列,在基因表达的调控中发挥重要作用。近年来,miRNA在肺动脉高压肺血管重塑中的作用备受关注,并且对于miRNA与HPH的研究越来越受到重视。越来越多的研究表明,miRNA有望作为肺动脉高压治疗的新靶点。miR-34a是一个有多种功能的miRNA,在许多疾病的病理生理中发挥着重要作用。最新研究显示[1],miR-34a在多种心血管疾病中存在异常表达。还有研究报道[2],miR-34a在干细胞分化为平滑肌细胞过程中显著升高,并发现miR-34a在促进平滑肌细胞分化中起重要作用。另有研究也已证实P53能够显著地诱导miR-34a的转录,且P53基因敲除的小鼠在低氧诱导下易发生HPH及肺血管重构[3]。
本研究旨在观察随着HPH肺血管重建过程中肺组织miR-34a和P53基因的表达情况。
1 材料与方法
1.1 实验动物选择
从北京维通利华实验动物技术有限公司订购雄性SD大鼠40只,体重140~160 g(动物合格证号:11400700115390)。运回西宁后随机分为常氧对照组和低氧第1 wk组、第2 wk组和第3 wk组,每组10只。
1.2 实验试剂及仪器选择
Rn-miR-34a primer(MS00000224)、Rn-U6 primer(MS00033740)、P53 primer QT00193522、18sRNAPrimer(QT00199374)、miScript II RT kit、miScript SYBR Green PCR kit及QuantiFast SYBR Green PCR kit均购自Qiagen公司;Fast Quant cDNA第一链合成试剂盒购自TIANGEN公司 ......
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