胡方杰，乔丽娟，俞科贤，蒲小燕，永 胜，刘 燕，许玉珍，李积东

    (青海大学基础医学院，西宁810001)

    观察发现，长期处于低氧环境下者机体免疫功能出现紊乱[1，2]。本研究采用模拟海拔5 000 m低氧和常氧对照条件分别饲养小鼠30天，通过测定各组小鼠脾脏指数、脾脏T淋巴细胞的数量及增殖能力和细胞培养上清液中细胞因子(IL-4、IFN-γ)的含量，初步揭示低氧对小鼠脾脏T淋巴细胞免疫功能的影响及作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    本实验研究对象为20只健康雄性BALB/c小鼠，5～7周龄，于西安交通大学医学院动物实验中心购买[SCXK(陕)2012-003]，体重(15±1)g。主要试剂和仪器:抗小鼠CD3抗体(CD3-PE)、抗小鼠CD4抗体(CD4-FITC)、抗小鼠 CD28抗体(CD28-FITC、CD28-PerCP)及抗小鼠 CD8 抗体(CD8-Per-CP)(eBioscienc公司)，FBS(杭州四季青生物工程材料有限公司)，红细胞裂解液、噻唑蓝、RPMI1640培养基(Solarbio公司)，伴刀豆球蛋白A(Sigma公司)，IL-4/IFN-γ的 Elisa试剂盒(Trut Specialty Zeal公司);低压氧舱室(中国贵州，DYC-3000)，流式细胞仪(BD公司，E34297600466，美国)，酶联免疫检测仪(Bio-Rad公司，Coda型，美国)，CO2培养箱(Thermo公司，380系列，美国)。

    1.2 方法

    1.2.1 构建低氧动物模型

    本实验组别有低氧组(A)和常氧对照组(C)，每组10只。其中C组在平均海拔400 m的西安交通大学医学院饲养，A组在青海大学医学院高原医学研究中心模拟5 000 m海拔的低压氧舱中饲养，两组小鼠饲养条件相同，常规分笼饲养30天。

    1.2.2 检测小鼠脾脏指数

    称重并记录数据，给予两组小鼠0.8 mL/100 g的10%乌拉坦行腹腔麻醉，无菌剖离获取小鼠脾脏，去除脾脏表面附着的结缔组织，称重并记录数据，计算小鼠脾脏指数:即脏器指数=脾脏质量/小鼠体重×100% ......