张海燕，张 华，连紫宛，高笑笑，王 刚*

    (1.青海大学医学院;2.青海省人民医院，青海西宁810001)

    本研究组前期的研究结果显示，雪灵芝(Areneria Kensuensis)水溶性提取物具有抑制肿瘤生长、激活机体免疫的作用[1-2]。以此为基础，通过建立S180荷瘤小鼠模型进行体内研究，探讨雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide，AKCP)对荷瘤鼠的肿瘤生长的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物与细胞

    无特定病原体(SPF)级Balb/c小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g，购自空军军区大学实验动物中心，动物合格证编号:0014827，动物许可证号:SCXK(军)2012-0007;S180细胞购自中国科学院上海细胞库。

    1.1.2 主要试剂与仪器

    雪灵芝(青海九康医药保健品有限公司)，注射用环磷酰胺(CTX，江苏盛迪医药有限公司)，Trizol Reagent(美国 Life technologies公司)，GoScriptTMReverse Transcription System(美国 Promega公司)，SuperReal荧光定量预混试剂(北京天根生化科技有限公司)，组织/细胞裂解液、BCA蛋白浓度检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)，SuperECL Plus超敏发光液(普利莱基因技术有限公司)，兔抗小鼠CyclinD1、PCNA单克隆抗体(美国abcam公司)，兔抗小鼠Bax多克隆抗体、兔抗小鼠Bcl-2多克隆抗体、辣根酶标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)，兔抗小鼠β-actin多克隆抗体(上海生工生物工程股份有限公司)。

    细胞培养箱(美国Forma公司)，LightCycler96全自动荧光定量PCR仪(瑞士Roche公司)，SDSPAGE电泳仪(Bio-Rad公司)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 S180 小鼠移植瘤模型的建立

    取生长状态良好的S180细胞，调整细胞浓度至5×106cells/mL，无菌条件下(按 0.2mL/只)给予Balb/c小鼠腹腔注射。7 d后抽取腹水，用0.9%氯化钠溶液洗涤细胞3次，并调整细胞浓度至2×107cells/mL，按每只 0.2 mL 接种于健康的Balb/c小鼠右前肢腋部皮下，建立小鼠S180移植瘤模型。

    1.2.2 分组及处理 ......