石 晴，韩 睿，邢江娃，李永臻，沈国平，永 胜，朱德锐*

    (1.青海大学医学院基础医学研究中心，西宁 810016；2：青海大学农林科学院，西宁 810016)

    青藏高原的湖泊类型众多，按照湖泊水体的矿化度不同可分为淡水湖(1 材料与方法

    1.1 样品采集及处理

    课题组于2017年7月采集青海湖水样(附带盐湖底泥)，采样点分别位于布哈河附近(99°48′32″E，36°59′29″N。Q1)、沙岛附近(100°39′26″E，36°51′47″N。Q2)、蓝宝石附近(99°45′46″E，38°8′42″N。Q3)及未知地点(99°47′34″E，36°44′37″N。Q4)，水样采集深度介于15～25 cm。水样理化参数(总有机碳TOC，总有机氮TN，总盐度TS；pH；Na+，K+，Mg2+，Ca2+，Cl-，SO42-，CO32-)测定由上海微谱化工技术服务有限公司完成，检测标准参照离子色谱分析方法通则(JY/T 020-1996)。

    1.2 基因组DNA提取与PCR扩增

    水样采用0.22 μm灭菌滤膜真空抽滤，将滤膜剪切，参照试剂盒(QI Aamp Fast DNA Stool Mini Kit，上海赛百盛公司)说明书抽提基因组DNA。分别对细菌和古菌16S rRNA基因的V3-V4区和V3-V5区进行PCR扩增(美国ABI Gene Amp 9700)，细菌引物为338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)；古菌引物为344F(5′-ACGGGGYGCAGCAGGCGCGA-3′)和915R(5′-GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′)。PCR扩增采用TransStart Fastpfu DNA Polymerase(北京全式金生物技术公司)，反应条件为95 ℃180 s，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s及72 ℃ 45 s，细菌和古菌分别进行27个和32个循环，最后于72 ℃延伸10 min。采用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒(美国Axygen公司)纯化PCR产物，产物用电泳法检测。

    1.3 测序数据优化处理与OTU聚类

    PCR产物采用Quanti FluorTM-ST蓝色荧光定量系统(美国Promega公司)检测定量，按照每个样品的测序量要求，进行相应比例的混合后，由上海美吉生物科技有限公司完成高通量MiSeq测序(Illumina MiSeq PE300) ......