马 美，苏占海，王海燕

    (青海大学医学院)

    乳腺癌中内分泌依赖性乳腺癌、HER2阳性乳腺癌的抗肿瘤药物研究进展顺利，而三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)因其组织学分级高，较其他乳腺癌亚型更具侵袭性而缺乏有效治疗药物。

    余甘子为大戟科叶下珠属植物(Phyllanthus emblica L)，主治癌症等，是一味重要的传统藏药[1]，1990年首次载入《中国药典》。既往研究表明，余甘子鞣质类成分柯里拉京对人鼻咽癌细胞KB、卵巢癌细胞A2780、骨肉瘤细胞OS-732、结肠癌细胞HCT-8、人肺腺癌细胞A549等有显著的生长抑制作用[2]。余甘子[3]叶总黄酮对肝癌细胞株Bel-7404、HepG-2，人宫颈癌细胞株Hela，人胃癌细胞株SGC7901，人鼻咽癌细胞株CNE-2，人肺癌细胞株H460，人卵巢癌细胞株A2780等均有良好的生长抑制作用。余甘子提取物对人肺癌细胞A549、肝癌细胞 HepG2 具有抑制作用。余甘子水提物呈剂量依赖性抑制体外培养的L929细胞的生长。

    因此，本研究以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为体外模型，研究藏药余甘子对MDA-MB-231细胞增殖的影响，并从基因水平探讨其对细胞周期蛋白CyclinG2、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21表达的影响，分析三阴性乳腺癌病人CyclinG2、p21的表达与预后情况，为藏药余甘子的临床应用提供新的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验药物

    余甘子的干燥果实(购于安徽亳州中药材交易中心，产地江西，取样量300g，合格证批号191104)。

    1.1.2 细胞株

    人乳腺癌MDA-MB-231 细胞(来自北京协和医科大学细胞库)。

    1.1.3 试剂与仪器

    MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(索莱宝，中国)；Trizol、RNAiso Plus、组织/细胞总RNA提取试剂盒和反转录试剂盒(宝日医，中国)；细胞周期与凋亡检测试剂盒(碧云天，中国)。

    旋蒸仪(EYELA，日本)、细胞培养箱(Forma，美国)、超净工作台(Thermo，美国)、酶标仪xMark-10483(Bio-rad，日本)、纯水仪(默克密理博，德国)、LightCycler OR 96 全自动荧光定量PCR仪(Roche，瑞士)、低温冷冻离心机(Eppendrof，德国)、琼脂糖凝胶电泳成像仪(Azure biosystem ......